跨膜蛋白是嵌入細(xì)胞膜磷脂雙分子層中實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)外跨越的一類蛋白，是細(xì)胞膜的重要組成部分。在物質(zhì)運(yùn)輸、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞間識(shí)別等多種細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要作用。人類的許多疾病都與這些膜蛋白功能異常有關(guān)，因此它們成為理想的藥物作用靶點(diǎn)。目前以跨膜蛋白為藥物靶點(diǎn)占現(xiàn)階段己知藥物靶點(diǎn)的60%以上。而針對(duì)抗體藥靶點(diǎn)，膜蛋白幾乎占90%以上。以跨膜蛋白為靶點(diǎn)的創(chuàng)新藥研發(fā)一直是醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。

抗原制備是研發(fā)抗體藥候選分子的首要問題，然而體外制備有活性的跨膜蛋白是技術(shù)難題?？缒さ鞍字苽潆y點(diǎn)：

具有全長完整結(jié)構(gòu)的多次跨膜蛋白在藥物研發(fā)中具有重要意義。為助力跨膜蛋白靶點(diǎn)藥物的開發(fā)，翌圣生物開發(fā)出基于哺乳細(xì)胞的病毒樣顆粒（VLPs）表達(dá)跨膜蛋白技術(shù)平臺(tái),該技術(shù)平臺(tái)所制備的多次跨膜蛋白，具備完整的生物活性。

  VLPs（Virus-Like Particles）是由多個(gè)病毒的一種或者多種衣殼蛋白自動(dòng)組裝形成的納米級(jí)別的微小顆粒。VLPs顆粒不含病毒核酸，不能進(jìn)行自主復(fù)制，安全性高，具有與病毒顆粒類似的整體結(jié)構(gòu)。細(xì)胞在感染病毒后會(huì)從細(xì)胞膜表面通過一種類似細(xì)胞膜出芽的方式分泌100-300nm左右的納米膜顆粒，包膜VLP可通過這種“出芽”的方式帶走含有目的蛋白的細(xì)胞膜，從而獲得可溶形式的多次跨膜蛋白。

VLP技術(shù)平臺(tái)可以通過各種宿主細(xì)胞系統(tǒng)生產(chǎn)，如昆蟲細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞。與昆蟲和植物細(xì)胞系統(tǒng)相比，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)更接近人類細(xì)胞的生理環(huán)境，因此在蛋白質(zhì)翻譯、修飾和折疊方面具有更高的保真度。YEASEN基于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的VLP技術(shù)平臺(tái)改進(jìn)了生產(chǎn)工藝，可以顯著提高表達(dá)水平，降低細(xì)胞毒性。

翌圣生物搭建了基于HEK293表達(dá)系統(tǒng)的包膜VLP技術(shù)平臺(tái)，能夠?qū)⒛康哪さ鞍淄暾故驹赩LP表面，使這些復(fù)雜的膜蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄缘?、高濃度的蛋白用于抗體免疫和篩選。YEASEN已成功開發(fā)出一系列VLP全長多次跨膜蛋白產(chǎn)品,包括Claudin 18.2、GPRC5D、CCR8、CD20及CLDN18.1等多個(gè)熱門靶點(diǎn)。

圖1.VLP展示目標(biāo)蛋白的過程

平臺(tái)優(yōu)勢

（1）ELISA驗(yàn)證Human Claudin18.2生物活性

Figure 2. Immobilized Human CLDN18.2 VLP at 5 ug/mL (30 uL/well) can bind IMAB362. The EC50 was approximately 0.008401 μg/ml.

（2）ELISA驗(yàn)證Human GPRC5D生物活性

Figure 3. Immobilized Human GPRC5D VLP at 5 ug/mL (30 uL/well) can bind Monoclonal Anti-Human GPRC5D antibody, The EC50 was approximately 0.006247 ug/ml.

（3）DLS驗(yàn)證Human A2AR純度

Figure 4. The mean peak Radius of VLP is 117.7 nm with more than 95% intensity as determined by DLS（dynamic light scattering）.

（4）ELISA 驗(yàn)證Human CD20 生物活性

Figure 5. Immobilized Human CD20 VLP at 5 ug/mL (30 ul/well) can bind obinutuzumab(P214063), The EC50 was approximately 0.006752 μg/ml.

Figure 6. Immobilized Human CD20 VLP at 5 ug/mL (30 ul/well) can bind Anti-CD20 / MS4A1 Reference Antibody (divozilimab), The EC50 was approximately 0.01698 μg/ml.