大部分來自實體組織器官的細(xì)胞都會貼壁，但不是所有的細(xì)胞在體外培養(yǎng)的情況下都會貼壁。許多細(xì)胞必須添加促貼壁物質(zhì)才能貼壁生長，促貼壁物質(zhì)一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白、玻連蛋白和膠原蛋白等。

二者大多數(shù)均為糖蛋白，因此具有較強(qiáng)的親水性。因此細(xì)胞貼壁與否和細(xì)胞本身分泌細(xì)胞外基質(zhì)的能力以及細(xì)胞本身表達(dá)的黏附分子的數(shù)量有關(guān)，也與有無合適的底物（培養(yǎng)瓶）有關(guān)。大多數(shù)的哺乳動物細(xì)胞在體內(nèi)和體外均附著于一定的底物而生長，在體外時這些底物可以是其他細(xì)胞、膠原、玻璃或塑料等。

膠原蛋白是支持細(xì)胞和組織生長的重要胞外基質(zhì)蛋白，其形成的胞外環(huán)境有利于多種細(xì)胞的粘附、生長、遷移和分化。膠原主要包括I型膠原，Ⅱ型膠原，Ⅲ型膠原，Ⅳ型膠原，Ⅴ型膠原，Ⅵ型膠原幾種。

I 型膠原—最常見的膠原蛋白，促進(jìn)細(xì)胞的貼壁和增殖，用于內(nèi)皮細(xì)胞，肝細(xì)胞，肌細(xì)胞等的培養(yǎng)。

軟骨細(xì)胞對II型膠原的黏附性較好；上皮細(xì)胞在Ⅳ型膠原底物上貼壁良好，而在I、II、III型膠原底物的培養(yǎng)板上貼壁情況較差。膠原應(yīng)用及建議細(xì)胞基質(zhì)濃度。

表1.不同膠原蛋白包被濃度

PART3

細(xì)胞纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）是一種細(xì)胞外糖蛋白，分別以可溶形式存在于體液中，或以不可溶形式存在于細(xì)胞外基質(zhì)中。作為主要的細(xì)胞粘附分子之一，F(xiàn)N 在許多重要的生理過程中起著關(guān)鍵性作用，如胚胎生成，傷口愈合，止血和血 栓形成。纖連蛋白表達(dá)的改變，降解以及組合與大量的病理發(fā)生密切相關(guān)，包括癌癥和纖維化。

重組纖維連接蛋白，可作為一種細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)，替換Matrigel、鼠尾膠原、血源纖連蛋白等，提高細(xì)胞貼壁率，增強(qiáng)細(xì)胞代謝水平，縮短細(xì)胞生長周期。也可直接添加到培養(yǎng)基中，替換或降低血清使用量，促進(jìn)細(xì)胞貼壁、遷移、移動生長、維持細(xì)胞狀態(tài)。

Human FN包被方法（以6孔板為例）

【注】：包被/鋪板實驗中，重組人纖維連接蛋白（rFN）工作液的加入量，應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)皿/瓶的大小進(jìn)行調(diào)整，請參見下表2。

表2. 重組人纖維連接蛋白包被濃度

玻連蛋白（Vitronectin），又稱S-蛋白或血清擴(kuò)散因子，是一種在肝臟中合成的分泌型糖蛋白，屬于小分子蛋白，借由Vitronectin 受體讓細(xì)胞貼附于細(xì)胞基質(zhì)中，主要促進(jìn)細(xì)胞遷移，增加細(xì)胞貼附性、細(xì)胞分裂、細(xì)胞生長分化等，并協(xié)助細(xì)胞間的訊號傳遞。

Human VTN蛋白包被方法

本方案僅作參考，具體包被條件需要根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)體系進(jìn)行優(yōu)化

【注】：VTN的工作濃度與不同細(xì)胞系密切相關(guān)，請根據(jù)不同細(xì)胞系對VTN包被濃度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。避免使用在4℃保存24小時以上的、配制好的VTN包被液進(jìn)行包被。

表3. Human VTN 包被不同培養(yǎng)器皿的建議使用體積

層粘連蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的重要組成，存在于所有上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的基底側(cè)，同時也是某些細(xì)胞與細(xì)胞間交互作用的中間媒介。層粘連蛋白對于生物活性至關(guān)重要，影響細(xì)胞分化、生長、遷移和粘附等。層粘連蛋白是一種細(xì)胞外基質(zhì)多結(jié)構(gòu)域三聚糖蛋白，是基底層的主要非膠原成分，支持粘附、增殖和分化。層粘連蛋白由A、B1和B2鏈組成，這些鏈由許多二硫鍵連接。層粘連蛋白支持多種細(xì)胞類型的生長和分化，包括上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞和肝細(xì)胞。Laminin 521已成為大規(guī)模擴(kuò)增誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPSC) 最有前景的涂層系統(tǒng)。

Laminin 521一般使用步驟（僅供參考）：

Poly-lysine多聚賴氨酸，是一種帶正電荷的氨基酸聚合物，包被在培養(yǎng)器皿表面，不僅能促進(jìn)細(xì)胞的貼壁，還能加強(qiáng)對血清蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的吸附，也可用作組織學(xué)分析的粘片劑。多聚賴氨酸分為D型和 L型。

Poly-D-lysine多聚-D-賴氨酸（PDL）和Poly-L-lysine多聚-L-賴氨酸（PLL）分子量為150000~300000，都可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁生長，常用的濃度是0.1 mg/mL。2個產(chǎn)品的區(qū)別在于PDL不會被細(xì)胞吸收，但PLL可以被某些細(xì)胞吸收，攝入過多會產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。

細(xì)胞培養(yǎng)一般步驟如下：