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尺寸排阻色譜柱是一種基于分子尺寸差異進(jìn)行分離的高效色譜柱。基于多孔性凝膠作為固定相，利用分子在凝膠孔道中的排阻效應(yīng)進(jìn)行分離。在色譜柱中，大分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻，較早地流出色譜柱；中等體積的分子部分滲透；小分子則能夠完q滲透入凝膠孔道內(nèi)，最后流出色譜柱。因此，樣品分子基本按其分子大小先后流出，從而達(dá)到分離的目的。
尺寸排阻色譜柱的使用技巧：
1、色譜柱的選擇與準(zhǔn)備
選擇正確的色譜柱：根據(jù)待測樣品的性質(zhì)和分子量范圍選擇合適的色譜柱。例如，對于分子量較大的樣品，應(yīng)選擇具有較大排阻極限的柱子。
色譜柱的儲存與維護(hù)：在不使用時應(yīng)將色譜柱存放在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中，如甲醇或乙醇，以防止微生物生長和色譜柱干裂。
2、樣品的準(zhǔn)備
樣品溶解性：確保樣品完q溶解在流動相中，避免樣品在柱上沉淀或聚集。
過濾與脫氣：樣品溶液應(yīng)通過0.22微米或更小的濾膜過濾，并徹d脫氣，以防止氣泡影響色譜分析。
3、流動相的選擇與優(yōu)化
流動相組成：選擇與樣品化學(xué)性質(zhì)兼容的流動相，常用的流動相包括水、鹽溶液或有機(jī)溶劑等。
流動相流速：調(diào)整適宜的流速，通常流速的增加可以縮短分析時間，但過高的流速可能引起柱效降低。
4、系統(tǒng)的溫度控制
恒定溫度：保持色譜系統(tǒng)在恒定的溫度下運(yùn)行，溫度波動可能會影響色譜峰的形狀和分離度。
5、檢測器的正確設(shè)置
選擇合適的檢測器：常用的檢測器有折射率檢測器和紫外吸收檢測器。選擇時應(yīng)考慮樣品的化學(xué)性質(zhì)和檢測靈敏度需求。
檢測器靈敏度：適當(dāng)調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度，以獲得清晰可辨的色譜峰而不至于過載。
6、數(shù)據(jù)分析與處理
校準(zhǔn)曲線的建立：使用一組已知分子量的標(biāo)樣來建立校準(zhǔn)曲線，這對于準(zhǔn)確測定未知樣品的分子量至關(guān)重要。
數(shù)據(jù)處理軟件：利用專業(yè)的數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和分析，可以有效提高數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性和效率。
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