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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源性基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi)的技術(shù)。那你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染是如何分類的嗎？讓我們一起來看看吧！
一、根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時間長短，可分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時轉(zhuǎn)染(transient transfection)：指將精心構(gòu)建的質(zhì)粒通過一定方式導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，其中所攜帶的外源基因不與細(xì)胞內(nèi)基因組整合。
細(xì)胞中外源基因的瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)時間有限，通常僅持續(xù)數(shù)日，直至外源基因由于細(xì)胞分裂過程中的各種因素而喪失。此方法常用于啟動子和其他調(diào)控元件的研究。
目前，憑借多種轉(zhuǎn)染試劑的創(chuàng)新，已能在哺乳動物細(xì)胞中實現(xiàn)瞬時轉(zhuǎn)染，以生產(chǎn)具有適當(dāng)折疊和翻譯后修飾的重組蛋白。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(Stable transfected)：外源DNA被整合到細(xì)胞基因組中或作為附加質(zhì)粒保留在細(xì)胞內(nèi)。與瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染能夠與宿主基因組整合，因此轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其后代細(xì)胞的基因組中同時保留了轉(zhuǎn)染的DNA。
由于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率較低，因此選擇有效的轉(zhuǎn)染策略和篩選方法至關(guān)重要。
二、根據(jù)轉(zhuǎn)染方式可分為化學(xué)、生物和物理方法。
細(xì)胞由帶有負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，對于大分子物質(zhì)而言，其形成了不可透過的屏障，例如DNA和RNA的磷酸骨架，它們也帶有負(fù)電荷。為了讓核酸穿過細(xì)胞膜，研究人員開發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類：
化學(xué)方法：利用載體分子包裹核酸，使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。例如陽離子脂質(zhì)體方法、磷酸鈣共沉淀法、其他陽離子物質(zhì)介導(dǎo)等技術(shù)。
生物方法：利用基因工程病毒將非病毒基因轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中。目前較常見的是各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
物理方法：通過在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生瞬時的孔道，導(dǎo)入DNA。例如電穿孔法、顯微注射法。
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