ELISA實驗的常見問題

來源：天津益元利康生物科技有限公司 2024年08月08日 14:43

　　ELISA是分子生物學(xué)、免疫學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中常用到的實驗操作之一，相信大家常常會有這樣那樣的實驗問題。下面讓我們一起來看看ELISA實驗的常見問題都有哪些吧！

　　1. 洗板不干凈

　　解決方法：

　?、俪浞窒礈欤喝绻窗宓臅r間不夠，會導(dǎo)致抗體殘留，陰性對照會顯色，嘗試延長洗板時間，增加洗板頻率，在洗液中添加表面活性劑Tween-20。

　　在洗板時要保證每步都洗滌干凈，充分拍板直至孔內(nèi)沒有明顯的殘留液體。

　?、诒苊饨徊嫖廴荆簵壢ハ匆汉头跤目贵w時避免交叉污染，移液槍頭盡可能一次性使用，拍板的濾紙不要反復(fù)使用。

　　2. 顯色液變質(zhì)或者試劑過期

　　解決方法：檢查試劑盒有效期，或使用新的試劑盒并按照說明書要求保存試劑盒。每次用剩下的顯色液最好不要回收，或者只回收洗凈的容器裝的顯色液。

　　3. 試劑稀釋有誤，檢測抗體/酶結(jié)合物工作液濃度過高

　　解決方法：按照說明書推薦的稀釋倍數(shù)稀釋抗體。

　　4. 試劑盒組分未平衡

　　解決方法：試劑盒每個組分都需要平衡至室溫后進(jìn)行實驗。

　　5. 混用其他試劑盒試劑

　　解決方法：保證使用試劑盒內(nèi)完整的一套試劑進(jìn)行實驗，不同品牌及不同批次間的試劑可能存在不匹配現(xiàn)象，不同批號的試劑不要混用。

　　6. 蒸餾水受酶等污染

　　解決方法：使用新鮮蒸餾水。

　　7. 培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長

　　解決方法：孵育時間過長、溫度過高可能會導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加，從而造成本底增高。檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定在37℃，按照說明書的反應(yīng)時間進(jìn)行孵育。

　　8. 酶標(biāo)板底部有污漬

　　解決方法：在加完終止液之后，檢測之前，用75%乙醇浸潤的脫脂棉球擦拭酶標(biāo)板底部，確認(rèn)沒有污漬之后再檢測。

　　9. 洗液被污染

　　解決方法：洗液現(xiàn)配現(xiàn)用，長期放置會析出，也可能會污染，導(dǎo)致背景偏高。

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