狠狠色丁香久久综合婷婷亚洲成人福利在线-欧美日韩在线观看免费-国产99久久久久久免费看-国产欧美在线一区二区三区-欧美精品一区二区三区免费观看-国内精品99亚洲免费高清

            產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


            化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

            歡迎聯(lián)系我

            有什么可以幫您? 在線咨詢

            SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit說明書

            來源:上海尚寶生物科技有限公司   2024年08月12日 10:53  

            SP(小鼠/IgG)-POD Kit說明書

            產(chǎn)品貨號:M20313

             

            產(chǎn)品規(guī)格:3ml/6ml/18ml

             

            產(chǎn)品簡介:

            本試劑盒適合于一抗為小鼠/IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn)DAB顯色。SP試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測而設(shè)計(jì)的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對生物素有的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(PI=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。

             

            產(chǎn)品組成:

            封閉液(正常山羊血清)

            3ml

            6ml

            18ml

            3% H2O2

            3ml

            6ml

            18ml

            Bio-羊抗小鼠/IgG濃縮液

            60ul

            120ul

            360ul

            鏈酶親和素-POD濃縮液

            30ul

            60ul

            180ul

            稀釋液

            10ml

            20ml

            60ml

            20×DAB顯色液A

            0.3ml

            0.6ml

            1.8ml

            20×DAB顯色液B

            0.3ml

            0.6ml

            1.8ml

             

            操作步驟:(以石蠟切片為例)

            1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯,三次乙醇)。

            2. 3% H2O2室溫處理5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

            3. 可選步聚:

            a. 熱修復(fù)抗原,將切片浸入0.01M檸檬酸鈉緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBSpH7.2-7.6)洗滌1-2次。

            b. 酶消化,滴加消化液,3710分鐘,PBSpH7.2-7.4)洗滌2-3次。

            c. 跳過此步,直接進(jìn)入下一步。

            4. 滴加封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,免洗。

            5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃孵育1小時(shí)左右或202小時(shí)左右,也可4℃過夜。PBSpH7.2-7.4)洗滌3次,每次2分鐘。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說,陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間;背景過高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)

            6. 根據(jù)用量,用稀釋液將Bio-羊抗小鼠/IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ulBio-羊抗小鼠/IgG濃縮液混勻,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/IgG工作液,20-37℃孵育30分鐘。PBSpH7.2-7.4)洗滌3次,每次2分鐘。

            7. 根據(jù)使用量,用稀釋液將鏈酶親和素-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul鏈酶親和素-POD濃縮液混勻,此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD工作液,20-37℃,30分鐘。PBSpH7.2-7.4)洗滌4次,每次5分鐘。

            8. DAB顯色:根據(jù)用量,用PBSpH7.2-7.4)配制,按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。 蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。 對于細(xì)胞爬片,固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5% Triton X-100 室溫孵育20分鐘,PBS漂洗兩次,3% H2O2處理15分鐘;PBS漂洗兩次,接上述第4步。對于冰凍切片,固定后,PBS漂洗兩次,接上述第二步。

             

            注意事項(xiàng):

            如果染色背景過高,在SP反應(yīng)之后,DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20PBSTpH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS2次,然后DAB顯色。

             

            保存:

            如果長時(shí)間不使用,請將所有試劑存放于-20℃,如經(jīng)常使用,可將封閉液,3% H2O220×DAB顯色液B存放于2-8℃以方便使用。

             

             


            免責(zé)聲明

            • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
            • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
            • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
            企業(yè)未開通此功能
            詳詢客服 : 0571-87858618