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非蛋白質(zhì)巰基含量檢測試劑盒（可見分光光度法）
產(chǎn)品貨號：BA1095
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
產(chǎn)品簡介：
生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自 我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。
巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰。
技術(shù)指標(biāo)：
檢出限：0.0007μmol/mL
線性范圍：0.003125-0.3μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 液體50mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數(shù)量配制并在當(dāng)天用完；
2. 試劑二：臨用前加入5mL無水甲醇充分溶解備用；
3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 動物、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）然后10000g，常溫離心10min，取上清置冰上待測。
3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液，10000g，常溫離心10min，取上清待 測。
二、測定步驟
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液稀釋至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 操作表：
對照管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
上清液（mL） | 0.3 | 0.3 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品（mL） | - | - | 0.3 | - |
試劑一（mL） | 0.65 | 0.65 | 0.65 | 0.65 |
試劑二（mL） | - | 0.1 | 0.1 | - |
H2O（mL） | 0.1 | - | - | 0.4 |
混勻，室溫放置10min，測定412nm吸光值，分別記為A對照、A測定、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白，計(jì)算ΔA 測定=A測定-A對照，算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。 | ||||
二、計(jì)算公式
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x軸，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測定代入公式得到x（μmol/mL）。
2. 非蛋白質(zhì)巰基含量計(jì)算：
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W
（2）按血清、培養(yǎng)液體積計(jì)算
非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/104cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提取：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr，樣本蛋白濃度，mg/ml；500：500萬個(gè)細(xì)胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL。
注意事項(xiàng)：
如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。
非蛋白質(zhì)巰基含量檢測試劑盒（可見分光光度法）
產(chǎn)品貨號：BA1095
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
產(chǎn)品簡介：
生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要的解毒功能，對生物體的自 我調(diào)節(jié)具有非常重要的生理意義。
巰基基團(tuán)與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有吸收峰。
技術(shù)指標(biāo)：
檢出限：0.0007μmol/mL
線性范圍：0.003125-0.3μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃ |
提取液二 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 液體50mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制：
1. 提取液的配制：將提取液一和提取液二按體積比1：1的比例混合配制，按照樣本數(shù)量配制并在當(dāng)天用完；
2. 試劑二：臨用前加入5mL無水甲醇充分溶解備用；
3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半胱氨酸，臨用前加入1.65mL提取液溶解為50µmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、1mL玻璃比色皿、甲醇、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1. 動物、植物組織：稱取約0.1g，加入1mL的提取液，制備成10%的勻漿，10000g，常溫離心10min，取上清待測。
2. 細(xì)胞或細(xì)菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）然后10000g，常溫離心10min，取上清置冰上待測。
3. 血清（漿），培養(yǎng)液：向0.1mL血清（漿）或培養(yǎng)液中加入1mL提取液，10000g，常溫離心10min，取上清待 測。
二、測定步驟
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：將50μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用提取液稀釋至0.3、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3. 操作表：
對照管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
上清液（mL） | 0.3 | 0.3 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品（mL） | - | - | 0.3 | - |
試劑一（mL） | 0.65 | 0.65 | 0.65 | 0.65 |
試劑二（mL） | - | 0.1 | 0.1 | - |
H2O（mL） | 0.1 | - | - | 0.4 |
混勻，室溫放置10min，測定412nm吸光值，分別記為A對照、A測定、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白，計(jì)算ΔA 測定=A測定-A對照，算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。 | ||||
二、計(jì)算公式
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制： 以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為x軸，ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA測定代入公式得到x（μmol/mL）。
2. 非蛋白質(zhì)巰基含量計(jì)算：
（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算
非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V提取÷W=x÷W
（2）按血清、培養(yǎng)液體積計(jì)算
非蛋白質(zhì)巰基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液體）÷V液體=11×x
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
非蛋白質(zhì)巰基含量（μmol/104cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr，樣本蛋白濃度，mg/ml；500：500萬個(gè)細(xì)胞；V液體：血清（漿）或培養(yǎng)液體積，0.1mL。
注意事項(xiàng)：
如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。
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