谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號：BA1126

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡介：

Glu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是組成蛋白質的20種氨基酸之一，而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4⁺，引起340nm處吸光度的上升，通過測定340nm吸光度的變化，計算谷氨酸含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前加入20mL試劑一；

2. 試劑四：臨用前加入1.5mL試劑二；

3. 標準液：10μmol/mL谷氨酸標準品。

技術指標：

檢出限：0.0037μmol/mL

線性范圍：0.0125-0.2μmol/mL

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

細菌、細胞或組織樣品：收集細胞或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次），10000rpm，常溫離心10min，取上清待測。

稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿，10000rpm，常溫離心10min，取上清待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標準溶液的制備 ：將標準品分別稀釋為0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的標準溶液。

3. 在有蓋EP管中加入下列試劑：

（1）標準管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL標準溶液、160μL試劑三和10μL試劑四混勻，立即記錄 340nm處20s時的吸光值為A1和5min20s時的吸光值A2，計算?A=A2-A1。

（2）測定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL樣本、160μL試劑三和10μL試劑四混勻，立即記錄340nm 處20s時的吸光值為A1和5min20s時的吸光值A2，計算?A=A2-A1。

三、谷氨酸含量計算：

1. 標準曲線的繪制：

以谷氨酸含量（µmol/mL）為x軸，標準管?A為y軸，繪制標準曲線y=kx+b。將測定管?A帶入方程得到x值（µmol/mL）。

2. 氨基酸含量計算：

（1）按照蛋白濃度計算：谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr

（2）按照樣品鮮重計算：谷氨酸含量（µmol/g 質量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W

（3）按照細菌或細胞數(shù)量計算：谷氨酸含量（μmol/10⁴ cell）＝x×V樣本÷（1000÷V樣總×V樣本）=0.001x。

V樣總：加入提取液體積，1mL；V樣本：加入的樣本體積，0.04mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；1000：細菌或細胞總數(shù)，1000萬。 

注意事項：

如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號：BA1126

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品簡介：

Glu廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是組成蛋白質的20種氨基酸之一，而且通過轉氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。

谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4⁺，引起340nm處吸光度的上升，通過測定340nm吸光度的變化，計算谷氨酸含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

產(chǎn)品內(nèi)容：

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前加入20mL試劑一；

2. 試劑四：臨用前加入1.5mL試劑二；

3. 標準液：10μmol/mL谷氨酸標準品。

技術指標：

檢出限：0.0037μmol/mL

線性范圍：0.0125-0.2μmol/mL

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

細菌、細胞或組織樣品：收集細胞或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次），10000rpm，常溫離心10min，取上清待測。

稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進行冰浴勻漿，10000rpm，常溫離心10min，取上清待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標準溶液的制備 ：將標準品分別稀釋為0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125μmol/mL的標準溶液。

3. 在有蓋EP管中加入下列試劑：

（1）標準管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL標準溶液、160μL試劑三和10μL試劑四混勻，立即記錄 340nm處20s時的吸光值為A1和5min20s時的吸光值A2，計算?A=A2-A1。

（2）測定管：在微量石英比色皿/96孔UV板中加入40μL樣本、160μL試劑三和10μL試劑四混勻，立即記錄340nm 處20s時的吸光值為A1和5min20s時的吸光值A2，計算?A=A2-A1。

三、谷氨酸含量計算：

1. 標準曲線的繪制：

以谷氨酸含量（µmol/mL）為x軸，標準管?A為y軸，繪制標準曲線y=kx+b。將測定管?A帶入方程得到x值（µmol/mL）。

2. 氨基酸含量計算：

（1）按照蛋白濃度計算：谷氨酸含量（µmol/mg）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr

（2）按照樣品鮮重計算：谷氨酸含量（µmol/g 質量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W

（3）按照細菌或細胞數(shù)量計算：谷氨酸含量（μmol/10⁴ cell）＝x×V樣本÷（1000÷V樣總×V樣本）=0.001x。

V樣總：加入提取液體積，1mL；V樣本：加入的樣本體積，0.04mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；1000：細菌或細胞總數(shù)，1000萬。 

注意事項：

如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。