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            植物組織蛋白質(zhì)提取方法

            來源:天津益元利康生物科技有限公司   2024年09月25日 11:42  

            方法一:

            1. 1. 根據(jù)樣品重量(1g 樣品加入3.5ml 提取液,可根據(jù)材料不同適當加入),準備提取液放在冰上。

            2. 2. 樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4 小時)。

            3. 3. 用離心機離心8000rpm40min4℃11100rpm20min4℃

            4. 4. 提取上清夜,樣品制備完成。

            5. 5. 蛋白質(zhì)提取液:300ml

            6. 1Mtris-HClPH845ml

            7. 甘油(Glycerol75ml

            8. 聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone6g

            9. 這種方法針對SDS-PAGE,垂直板電泳!

            10. 植物組織蛋白質(zhì)提取方法


            方法二:

            1. 三氯醋酸丙酮沉淀法,這種方法針對雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點!當然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會減少!

            2. 1. 在液氮中研磨葉片

            3. 2. 加入樣品體積3 倍的提取液在-20℃的條件下過夜,然后離心(4℃8000rpm以上1 小時)棄上清。

            4. 3. 加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1 小時),然后真空干燥沉淀,備用。

            5. 4. 上樣前加入裂解液,室溫放置30 分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm 以上1 小時或更長時間以沒有沉淀為標準),可臨時保存在4℃待用。

            6. 5. 用Brandford 法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。

            7. 提取液:含10%TCA 0.07%β-巰基乙醇的丙酮

            8. 裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M DTT65ul/ml。


            9. 植物組織蛋白質(zhì)提取方法



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