新品應運而生

非特異性核酸酶（以下簡稱“核酸酶”）廣泛應用于生物制品生產(chǎn)過程中的宿主核酸殘留（Host Cell DNA，以下簡稱“HCD”）控制。酶活性是核酸酶的主要性能指標，受溫度、鹽濃度和有效鎂離子濃度等多種因素影響。

工藝條件的改變、酶配液和運輸過程會造成核酸酶活性變化，增加HCD的控制風險和工藝開發(fā)難度。酶活性作為核酸酶殘留的監(jiān)測指標已納入《中國藥典》2025版的新增內(nèi)容討論，核酸酶全生命周期的準確活性評價對于HCD去除工藝穩(wěn)定性和酶使用成本控制至關重要。并且過度添加核酸酶將導致成本和酶殘留風險上升。

基于此，義翹神州開發(fā)了高易用性和穩(wěn)定性的核酸酶活性檢測試劑盒（貨號：NE001），已成功支撐客戶藥品在FDA的上市申報。

表1：核酸酶活性檢測試劑盒組分

1核酸酶活性檢測試劑盒適用范圍

核酸酶活性檢測試劑盒用于其全生命周期的質(zhì)量控制，包括原料入廠質(zhì)控、中間儲存液穩(wěn)定性評價、核酸酶去除宿主核酸工藝研究和核酸酶殘留檢測等。試劑盒可用于傳統(tǒng)非耐鹽核酸酶、耐鹽核酸酶等HCD控制用核酸酶，以及其他具有雙鏈DNA水解活性的非特異性核酸酶，包括但不限于DNase I、Exonuclease I、Exonuclease III、Micrococcal nuclease、S1 nuclease、T5 exonuclease、T7 endonuclease、SuperNuclease、Benzonase®。

2 核酸酶活性檢測試劑盒優(yōu)勢

操作像測蛋白濃度一樣簡單

國家標準品標定，高重現(xiàn)性

高穩(wěn)定性、高精密度、高靈敏度

核酸酶活直接定量方法，不依賴酶參考品

2.1操作簡單，適用性高

傳統(tǒng)核酸酶測活方法常以天然提取的不溶雙鏈DNA（如鮭魚精DNA或小牛胸腺DNA）為底物，利用酶水解雙鏈DNA生成單鏈DNA的原理，依據(jù)底物的吸光度變化，定量檢測核酸酶活性。該方法底物批間一致性和均一性差，測活方法繁瑣，給核酸酶活性準確定量帶來了巨大挑戰(zhàn)。

義翹神州開發(fā)的試劑盒采用高靈敏度的雙鏈DNA熒光底物，通過檢測核酸酶水解底物釋放的產(chǎn)物熒光信號檢測酶活性。操作流程與BCA法或考馬斯亮藍法測定蛋白濃度一樣簡單，只需將待測樣本經(jīng)稀釋液稀釋后與底物混合孵育5-60分鐘后終止，讀取熒光值，再利用產(chǎn)物熒光標準曲線線性回歸計算核酸酶水解產(chǎn)物量，熒光產(chǎn)物量與反應時間的比值即為酶活性。

與傳統(tǒng)測活相比，數(shù)據(jù)處理不需要使用4-PL擬合或線性區(qū)間截取等繁瑣方法對酶反應速率進行擬合計算。且由于產(chǎn)物熒光信號穩(wěn)定，熒光酶標儀、qPCR儀、熒光微量光度計或其他熒光定量設備均可使用本試劑盒進行核酸酶定量，產(chǎn)品儀器適用性高。

試劑盒操作示意圖

2.2高穩(wěn)定性、高精密度和高靈敏度

試劑盒產(chǎn)物參考品經(jīng)國家標準品標定，使得本方法具有高重現(xiàn)性的優(yōu)勢。試劑盒方法按照《中國藥典》要求，完成系統(tǒng)的方法學驗證，驗證結果顯示本試劑盒方法具有高穩(wěn)定性、高精密度和高靈敏度的優(yōu)點。

表2：義翹神州核酸酶活性檢測試劑盒方法學驗證結果匯總表

*核酸酶活性含量=產(chǎn)物量/反應時間。

熒光底物法因其高靈敏性已被應用到核酸酶殘留檢測。傳統(tǒng)熒光法核酸酶活性檢測殘留一般采用DNase I作為酶參考品，由于不同核酸酶在不同測活條件下的相對活性不同，因此無法直接用于其他核酸酶的活性標定。核酸酶脫冷或反復凍融易失活，因此使用過程中需要對核酸酶參考品進行系統(tǒng)的穩(wěn)定性考察與確認，以確保檢測結果的可靠性。

與傳統(tǒng)熒光底物法依賴核酸酶參考品的間接檢測不同，本試劑盒使用經(jīng)國家標準品標定的產(chǎn)物參考品直接測定核酸酶活，避免了因酶參考品不穩(wěn)定帶來的檢測結果不準確風險。

表3：核酸酶活性檢測方法比較表

核酸酶“全生命周期”產(chǎn)品