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            巨噬細胞清除小課堂 | 第一課:注射方法及給藥

            來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年11月20日 17:52  

            巨噬細胞在身體的不同部位發(fā)揮著關鍵的作用,然而,為了更深入地研究特定部位巨噬細胞的具體功能以及它們在疾病發(fā)生發(fā)展中的影響,精準地清除巨噬細胞成為了關鍵的研究手段。氯磷酸鹽脂質體(Clodronate Liposomes)是目前最為成熟,最為經(jīng)濟且最為理想的一種有效的巨噬細胞清除工具。借助腹腔,尾靜脈等多種給藥方式實現(xiàn)不同組織部位中巨噬細胞的清除。


             

            接下來,我們將通過一系列專題分享,為大家展示在不同部位進行巨噬細胞清除的方法與成效,希望能為各位科研工作者提供有益的參考和借鑒。

             

             

            注射方法介紹

             
             

            尾靜脈注射

             

            尾靜脈注射在24h后即達到最大耗竭,應注意檢測時間節(jié)點。

             
            01
             

            將小鼠放在倒扣的飯盒內,從孔口拉出尾巴,小鼠的尾部有2條動脈和3條靜脈,2條動脈分別在尾部的背側面和腹側面,3條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩側的靜脈;

            02
             

            將紗布浸泡于約70℃溫水中(或浸泡在酒精中),拿出后包裹尾巴,以達到使尾部血管擴張及軟化表皮角質的目的;

            03
             
            進行尾部靜脈注射時,以左手拇指和食指前后摁住鼠尾,留出約2 cm一段,使皮膚緊張,靜脈更為充盈,右手持1 mL針頭注射器,使針頭與靜脈平行(小于30°角),從尾巴的下1/4處進針,開始注入藥物時應緩慢,仔細觀察,如果無阻力,無白色皮丘出現(xiàn),說明已刺入血管,可正式注入藥物;
            04
             

            有的實驗需連日反復尾靜脈注射給藥,注射部位應盡可能從尾端開始,按次序向尾根部移動,更換血管位置注射給藥。拔出針頭后,用棉球按住注射部位輕壓1-2 min,止血;

             

             

             

             

            腹腔注射

             

            腹腔注射在48-72h后達到最大耗竭,應注意檢測時間點。

             
            01
             

            首先采用背側保定法抓取小鼠,使其頭部稍向后仰,腹部向上,小鼠左后肢用小指固定住,再用75%酒精棉球消毒注射部位;

            02
             

            小鼠腹腔注射的位置在:下腹部腹中線兩側0.5cm(與大腿根部平齊)處,未免傷及臟器,保定小鼠時需使其頭部稍向后仰,以使其下腹部臟器上移;

            03
             
            將注射器針頭刺入皮膚,進入皮下后,沿皮下向前推進2-3mm,針頭與皮膚呈45度角刺入小鼠腹腔。注意:穿透腹膜后,針尖的阻力消失;
            04
             

            回抽針栓,如無回血或液體即可注入藥物;

            05
             

            注射完畢后,輕輕旋轉針頭,再緩慢拔出注射器,以免液體外漏。

             

             

            不同研究部位,也會有不同的注射方法,如:皮下注射、氣管給藥、顱內注射等。實驗前應參考相關文獻及咨詢Yeasen技術團隊。

             

             

             

            給藥周期及計量

             
             
            短期給藥
            即注射一次氯磷酸鹽脂質體200 μl(20-25g體重),在特定時間檢測巨噬細胞清除效率或進行下游實驗。
             
             
             
             
            長期給藥

            即需要超過一周或以上實現(xiàn)巨噬細胞清除。以WT小鼠為例,一般先給藥200 μl(20-25g體重),之后每2 - 3天給藥一次,每次用量100μl-150μl。

             
             
             

             

             

            參考試驗方案

             

            器官/ 巨噬細胞

            劑量用法 (20-25g/每只小鼠 )

            脾臟/紅髓區(qū)巨噬細胞

            單次給藥:200 µl/小鼠 (靜脈注射或腹腔注射)。

            長期耗竭:第一次給藥劑量200 µl/小鼠25g左右),以后按2-3天一次給藥100 µl/小鼠

            肝臟/Kuffer細胞

            單次給藥:200 µl/小鼠 (靜脈注射或腹腔注射)。

            長期耗竭:第一次給藥劑量200 µl/小鼠,以后按2-3天一次給藥100 µl/小鼠

            /肺泡巨噬細胞

            靜脈注射(150-200 µl)聯(lián)合氣管內或鼻內(50 µl)獲得最佳效果。

            淋巴結

            注射(100-200 µl)/小鼠,具體給藥方案可參考文獻。

            /小膠質細胞

            腦室內進入腦脊液,10 µl/小鼠,50 µl/大鼠。

            血液/單核細胞

            150-200 µl/小鼠(靜脈注射),24小時內可達最大耗竭率,但1-7天的最大耗竭率與小鼠品系有關。

            注:以上僅參考,實驗前應參考相關文獻及咨詢YEASEN技術團隊

             

             

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            產品名稱

            貨號

            規(guī)格

            Clodronate Liposomes(From Vrije Universiteit Amsterdam) 體內巨噬細胞清除劑

            40337ES08

            5 mL

            40337ES10

            10 mL

            Control Liposomes( PBS ) 體內巨噬細胞清除劑空白脂質體對照

            40338ES08

            5 mL

            40338ES10

            10 mL



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