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細胞培養(yǎng)過程中經常需要進行細胞消化的操作，因而消化細胞所用到的胰蛋白酶會細胞培養(yǎng)，也是很重要的，會影響到細胞的生長狀態(tài)，下面就細胞胰蛋白酶進行一個詳細的介紹。
胰蛋白酶大致可以分為兩種，一種是重組胰蛋白酶，一種是非重組的胰蛋白酶。
非重組的胰蛋白酶來源于動物提取，帶有動物源性，也是傳統(tǒng)使用的胰蛋白酶，普遍存在于動物消化系統(tǒng)，直接提取自?；蜇i的胰腺組織。
重組胰蛋白酶是利用基因重組技術生產的，沒有動物源性。
產品介紹和應用
非重組胰蛋白酶（有動物源性）
產品特點
非重組胰蛋白酶（又稱胰酶）是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸蛋白水解酶，能特異性切割帶正電荷賴氨酸和精氨酸羧基端，通過多重結晶方式純化，并進一步采取層析及超濾技術制備而得，帶有動物源性。
由于胰酶可以作用跨膜蛋白和胞外基質中的蛋白質，如：鈣粘素、整聯蛋白等，因此胰酶現常用于解離組織和單層細胞。雖然胰蛋白酶能使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散，但不同的組織或者細胞對胰酶的反應是不一樣的，分散細胞的活性還與胰酶濃度、反應溫度和時間有關，在pH條件為7-9、溫度為37℃的條件下胰酶分散細胞的作用能力。將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，將鈣和鎂結合成六齒結構，能削弱細胞間粘附，增強胰蛋白酶對水解靶向肽鍵的獲取。
早期的胰蛋白酶在生物制藥領域的主要應用是胰島素的生產，很快也在其他細胞培養(yǎng)領域應用起來。動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng)，不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。
應用領域
1. 胰島素、滅活疫苗生產；
2. 組織細胞分離及培養(yǎng)；
3. 臨床外科使用；
4. 食品行業(yè)加工助劑。
重組胰蛋白酶（非動物源性 ）
產品特點
重組胰蛋白酶是一種使用基因工程技術生產的酶，具有穩(wěn)定性好、純度高、無動物來源的優(yōu)點?，F代生物制藥的生產過程中，使用含有動物源的原料，可能會將引起人畜共患病的潛在病毒源帶入產品中，如瘋牛病的BSE、口蹄疫病毒等，為了減少污染源，通過基因工程技術合成胰蛋白酶，解決了傳統(tǒng)使用的豬或牛胰蛋白酶可能帶來病毒污染的風險。
重組胰蛋白酶多用重組大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達并經過多步層析純化獲得，無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源，能特異性切割多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基。因其無動物源污染性和純度高，在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學等領域中有著廣泛的應用。
市場主流的重組胰蛋白酶是利用DNA重組技術在大腸桿菌或酵母中表達的重組豬胰蛋白酶，其氨基酸序列與豬胰蛋白酶一致，具有與天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。其由223個氨基酸構成，含有6對二硫鍵。該酶包含兩種胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF和TLCK等、金屬離子螯合劑如EDTA等的抑制。重組胰酶用于無血清培養(yǎng)，同胰蛋白酶一樣，不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。
應用領域
1. 疫苗和重組胰島素生產；
2. 細胞分析的組織樣本制備；
3. 免疫細胞治療；
4. 生物藥物生產；
5. 蛋白質序列、結構及組學研究。
產品詳細對比
產品 | 非重組胰蛋白酶（有動物源性） | 重組胰蛋白酶（無動物源性） |
產品貨號 | 40123ES（無酚紅，含EDTA） 40124ES（無酚紅，無EDTA） 40126ES（含酚紅，無EDTA） 40127ES（含酚紅，含EDTA） | 40512ES 20416ES（質譜級） |
來源 | 取自牛、豬、羊的胰臟 | 大腸桿菌（40512ES） 畢赤酵母（20416ES） |
安全性 | 潛在病原污染 | 無外源性病毒污染 |
純度 | 1：250胰蛋白酶溶液中90%以上為雜質 | 高純度（β-trypsin≥70%， α-trypsin≤20%） |
消化細胞類型 | 大部分連續(xù)的強貼壁細胞系 | 大部分連續(xù)的強貼壁細胞系 |
糜蛋 | 每2500單位胰蛋白酶中不得多于50單位的糜蛋白酶。 | 無糜蛋白酶等雜酶污染 |
比活 | ≥2500 USP units/mg 蛋白 | ≥3800 USP units/mg 蛋白 |
消化效果 | 不穩(wěn)定 | 消化能力強，酶用量少 |
自切率 | 容易自切產生自身自切片段影響質譜分析結果 | 容易自切產生自身自切片段影響質譜分析結果 |
溶解液 | 含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液 | 含或不含Ca2+、Mg2+的HBSS溶液（40512ES）； 1 mM HCL（20416ES） |
細胞存活 | 正常 | 正常 |
是否需要凍融 | 是 | 是 |
細胞消化中除了用到最常見的胰蛋白酶外，還有其他很多種類的消化酶產品也可能被用到，這里做一個總結，供大家參考：
關于膠原酶的應用領域
膠原酶（Collagenase）是一種肽鏈內切酶，能夠特異性的識別Pro-X-Gly-Pro序列并切割該序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵，膠原酶是一種可以降解具有三股超螺旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶，能夠有效水解結締組織和上皮組織細胞外基質內的其他蛋白、多糖和脂質，使得本品非常適用于組織消化。
1. 膠原酶Ⅰ，通常用作上皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細胞的制備；
2. 膠原酶II，用于心臟、骨、肌肉、肝、甲狀腺和軟骨等組織來源細胞的制備；
3. 膠原酶III，常用于乳腺細胞的制備；
4. 膠原酶IV，通常用于胰島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。
5. 膠原酶Ⅴ，適用于胰腺小島細胞和結締組織細胞的分離。
關于復合胰蛋白酶應用領域
Accutase是包含蛋白水解酶和膠原酶活性的一種細胞消化液，是胰酶-EDTA消化液的替換產品，用于從常規(guī)組織培養(yǎng)器皿和粘附培養(yǎng)器皿中消化細胞。Accutase適用于組織解離和細胞分離，因分離后的細胞能保持完好的表面抗原，且不含任何動物動物或者細菌來源組分，可滿足對后續(xù)如細胞表面標記、病毒生長分析、流式細胞分析以及生物反應器相關檢測等多種實驗的要求。
關于胰酶替代物的應用領域
PerfCell Tryzyme™ Express 酶產品純度高，細胞傷害小，消化作用溫和，且能穩(wěn)定保存在室溫條件，逐漸成為不同細胞系培養(yǎng)的理想消化酶。這類的產品使用過程無需使用胰蛋白酶抑制劑來滅活，同時也不含有動物源，對于一些無血清生長的貼壁細胞實驗更為友好。
關于分散酶應用領域
Dispase II分散酶II，是一種非特異性金屬蛋白酶，在細胞生物學中常用于從不同的組織或器官分離出單細胞，并用于后續(xù)細胞培養(yǎng)，如原代細胞的分離，細胞傳代等，還可用于消除懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的細胞聚集。與其他細胞生物學常用蛋白酶（如胰蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶等）相比，該酶具有以下優(yōu)勢：
1. 快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性；
2. 來源于細菌，無支原體或其他動物病毒污染；
3. 穩(wěn)定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響；
4. 可用于多種類型組織和細胞的分離等。
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貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 |
40123ES60 | PerfCel™l Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），無酚紅 | 100 mL |
40124ES60 | PerfCell™ Trypsin-no EDTA (0.25%), no phenol red 胰酶-無EDTA溶液（0.25%），無酚紅 | 100 mL |
40126ES60 | PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液（0.25%），含酚紅 | 100 mL |
40127ES60 | PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚紅 | 100 mL |
40101ES25 | Trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末) | 25 g |
40512ES10/60 | PerfCell™ Recombinant Trypsin（powder）重組胰蛋白酶（粉末） | 10 mg/100 mg |
20416ES60 | 重組胰蛋白酶（質譜級） | 100 µg |
40134ES60 | PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，含酚紅 | 100 mL |
40135ES60 | PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，無酚紅 | 100 mL |
40506ES60 | ACCUTASE細胞消化液 | 100 mL |
40104ES60/80 | Dispase II 分散酶II | 100 mg/1 g |
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