隨著蛋白質(zhì)科學的飛速發(fā)展，蛋白純化技術(shù)在生物研究領(lǐng)域和生物技術(shù)工業(yè)中的重要性日益凸顯。這一核心技術(shù)涉及利用基因工程方法，將目標蛋白的編碼信息整合入宿主細胞，從而誘導它們高效地生產(chǎn)所需蛋白。隨后，通過一系列精細的體外操作步驟實現(xiàn)對蛋白質(zhì)的高純度提取。蛋白純化使得科學家能分離出單一類型的蛋白質(zhì)，這對于深入研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能、開發(fā)新藥、進行疾病診斷以及推動生物技術(shù)的應用至關(guān)重要。該技術(shù)不僅確保了科學實驗的準確性，還為生命科學領(lǐng)域的發(fā)展提供了持續(xù)的動力。

圖1.親和層析原理圖[1]

在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域，融合標簽作為一種強大的工具，通過與目標蛋白結(jié)合以促進實現(xiàn)各種實驗目的，常見融合標簽的功能可參考下表。然而，一旦這些標簽在完成其初始輔助功能后繼續(xù)殘留在融合蛋白上，可能會對后續(xù)實驗造成不良影響，如干擾動物免疫實驗或影響蛋白的生物學活性。因此，去除這些不再需要的融合標簽變得至關(guān)重要，以確保蛋白質(zhì)的正常功能和實驗的準確性。

表1.常見融合標簽功能及酶切手段介紹

今天，我們隆重向您推介一款高效精準去除融合標簽的產(chǎn)品——UCF.ME® rTEV Protease，憑借其簡潔易操作的實驗流程，此款酶能夠便捷地從融合蛋白中切除無需的標簽，進而獲得高純度的目標蛋白。

UCF.ME® rTEV Protease

TEV Protease 是一種廣泛應用于切除重組蛋白融合標簽的蛋白酶，以其高度的位點特異性而著稱。它嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，在谷氨酰胺和甘氨酸或絲氨酸之間進行精確剪切，其中最常見的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。這種特異性確保了蛋白加工過程中的精確性和效率。

圖2.TEV蛋白酶作用原理圖[2]

翌圣UCF.ME® rTEV Protease 是一款經(jīng)過基因工程改良和精細純化的重組蛋白酶，它不僅保留了天然TEV酶的完整功能活性，而且在更廣泛的溫度范圍內(nèi)展現(xiàn)出的穩(wěn)定性和特異性。該產(chǎn)品在rTEV Protease (Cat#20403)基礎(chǔ)上進行了工藝優(yōu)化，其純度更高、活性更強、宿主gDNA殘留更低，確保在實際應用中對蛋白融合標簽的切割效率更高，且能有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風險。UCF.ME® rTEV Protease在pH 7.0和30°C的條件下表現(xiàn)出最佳活性，但即使在pH 6.0-8.5、溫度4-30°C的廣泛條件下也保持活性，以適應不同蛋白質(zhì)加工需求。值得一提的是，UCF.ME® rTEV Protease 的N端帶有6×His標簽，可通過Ni-NTA樹脂進行高效去除，從而實現(xiàn)目標蛋白的精準純化。

性能展示

1. 剪切效率高：蛋白標簽切除

以含有UCF.ME® rTEV Protease剪切位點的融合蛋白（3 μg）為底物，分別投入UCF.ME® rTEV Protease 10、5、3 U，在30℃條件下反應1 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測剪切效果。結(jié)果顯示翌圣的UCF.ME® rTEV Protease在投入量為3 U以上時，可高效剪切底物，剪切效率＞90%。

圖2.UCF.ME® rTEV Protease剪切活性驗證

2. 宿主gDNA殘留低：有效降低引入外源物質(zhì)殘留的風險

通過對不同批次的UCF.ME® rTEV Protease進行宿主（大腸桿菌）gDNA殘留檢測，結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留遠低于< 1copies/U。

圖3.UCF.ME® rTEV Protease宿主gDNA殘留結(jié)果

3. 適用條件廣泛：可適應不同蛋白質(zhì)加工需求

通過對UCF.ME® rTEV Protease不同條件下的剪切活性進行驗證，結(jié)果顯示UCF.ME® rTEV Protease在4-30℃條件下均有較強的活性，可適配客戶不同應用場景需求。

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參考文獻：

[1] Parikh I , Cuatrecasas P .Affinity Chromatography[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.

[2] Paththamperuma C, Page R C. Fluorescence dequenching assay for the activity of TEV protease[J]. Analytical biochemistry, 2022, 659: 114954.