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            陽離子交換柱的使用方法簡介

            來源:上海迪發(fā)儀器儀表有限公司   2012年06月02日 10:19  
            陽離子交換柱的使用方法
             
            注意

              Chrompack IonoSpher C 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導入堿性溶劑pH>6.5或酸性溶劑pH<2.5會溶解硅膠材料導致柱子損壞。


              1. 簡介
              Chrompack IonoSpher C 柱填充硅膠基質(zhì)的強陽離子交換材料,含有磺酸鹽功能團。特別設計用于使用常規(guī)HPLC分析有機和無機陽離子。

              2. 色譜柱老化
              在開始分析工作以前,柱子必須經(jīng)過正確的老化。一個沒有正確老化的柱子可能會帶來問題,諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。

              要老化這類柱子,首先要使用甲醇淋洗,然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進行平衡。

              在發(fā)貨以前,每根柱子都已經(jīng)測試過并進行了老化。因此沒有必要在*次使用時用水沖洗。

              3. 洗脫液
              推薦在這類柱上使用的洗脫液是要求低電導的緩沖液,例如檸檬酸或酒石酸緩沖液或其混合溶液pH范圍從2.56.5,其中有乙二胺作為洗脫陽離子。

              不能使用水楊酸緩沖液,因為水楊酸分解產(chǎn)物會改變固定相的性質(zhì)。

              洗脫液在使用以前要脫氣,并用0.5微米濾膜過濾,防止發(fā)生檢測和泵送問題。

              一定要在開始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長,否則你的柱子會堵塞,柱壓會升高到無法接受的水平。


              4. 流量和壓力

             
            柱內(nèi)徑毫米
            流速(ml/min)*
            流速(ml/min)zui高
            2.0
            0.2
            1.0
            3.0
            0.4
            2.0
            4.6
            1.0
            4.0
            10.0
            4.7
            18.0
             


              

              注意:zui高壓力:不銹鋼柱:4500psi;玻璃柱:3000psi

              增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動。

              如果你想更換柱子,要降低流量至0,等待洗脫液*流出柱子為止2分鐘。

              拆除柱子而沒有等待壓力的降低會損壞柱子。

              高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。

              使用保護柱見第6節(jié)會防止污染物沉積在分析柱上。

              5. 樣品處理
              保持柱子長壽的關鍵是進樣前適當?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將疏水?/span>/與流動相極性差別很大的化合物泵入色譜柱,不管是來自流動相還是樣品。特別地,要禁止導入顆粒雜質(zhì)。這些zui終都會造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。

              6. 保護柱
              一定要使用保護柱,因為樣品和洗脫液污染可能會造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對于ChromSep 柱我們建議使用ChromSep Cation 交換保護柱。當柱壓增高的或者觀察到柱效降低的時候就需要更換保護柱了。對于常用不銹鋼柱,我們建議使用Chromguard Cation exchange High Efficiency10X3.0mmHigh Capacity高容量50X3.0mm。

              7. 進樣量和濃度

            柱尺寸(長度*內(nèi)徑)
            zui大樣品體積
            250×2.0mm
            ±10μl
            200×3.0mm
            ±15μl
            250×4.6mm
            ±50μl
            250×10.0mm
            ±250μl
             
             
             
             
             
             


              當樣品的洗提強度比洗脫液低在柱樣品預濃縮的時候,更高的樣品量也可以注射。

              
            8. 溫度
              Chrompack IonoSpher C 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性,建議不要在40°C以上使用。

              
            9. 貯存
              在貯存柱子以前,建議先用去離子水,然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿緩沖液或者其他含鹽類的洗脫液的情況下貯存色譜柱。

              
            10. 檢測靈敏度
              對于陽離子的檢測,建議進行電導率的測定,使用前面提到的低電導洗脫液。

              
            11.柱效損失的可能原因

              1額外的峰展寬。要保證管路的長度和內(nèi)徑都保持zui小。

              2洗脫的平衡時間不夠。

              3不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強度。

              4洗脫液中存在不正確的陰離子。制備新鮮的洗脫液。

              5固定相污染。

              a.高柱壓伴隨分辨率降低。

              1] 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。

              a樣品來源---過濾或離心

              b洗脫液來源---過濾洗脫液,封閉洗脫液容器。

              c系統(tǒng)來源---沖洗整個系統(tǒng)管路和泵;安裝在線系統(tǒng)過濾器。

              2] 蛋白質(zhì)類物質(zhì)的積聚

              a微生物在樣品中生長。

              b微生物在洗脫液中生長。

              b. 正常柱壓伴隨柱效降低

              1] 有機污染

              a樣品中有脂肪,油脂,脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。

              b從樣品中帶來的不確切的有機物或未正確制備的洗脫液。

              c在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機物,例如在運輸時從大氣中帶來。


              12. 對于糾正污染問題的可能有效的操作

              1準備新鮮的洗脫液

              在很多情況下,柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染。所以,要在使用柱子以前準備新鮮的洗脫液,沖洗所有液體管路。洗脫液應當用0.20.4微米的濾膜過濾,在使用以前要脫氣。

              2色譜柱再生

              要進行色譜柱的再生工作

              a. 首先倒轉(zhuǎn)色譜柱

              b. 0.4ml/min的流速用1M NH4NO3洗脫30ml。

              c. 0.4ml/min的流速用4060 vv的甲醇/水洗脫30ml。

              d. 0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml

              e. 0.4ml/min的流速用水洗脫30ml。

              f. 0.4ml/min的流速用洗脫液洗脫30ml。

              g. 將柱子轉(zhuǎn)回正常方向。

              用洗脫液平衡。
             
             
             
             
            上海迪發(fā)儀器儀表有限公司為瑞士Hamilton華東區(qū)授權代理商,為您提供*的離子交換柱選型指南,更多詳情請訪問:www.difa17.com,:,技術:difabio
             
             
             

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