手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
二維梯度PCR(Gradient PCR)是一種PCR的改良技術，它采用兩種溫度梯度對PCR反應進行優(yōu)化，能夠提高PCR反應的特異性和產(chǎn)物純度。在一個溫度梯度的條件下進行PCR反應。它基于不同溫度下引物結合能力的變化，通過將引物濃度、溫度逐漸升高或降低，使反應中優(yōu)化溫度梯度，以達到適宜的特異性和放大產(chǎn)物的特定大小。這種方法可以避免由于引物結合不足或非特異性產(chǎn)生的雜交產(chǎn)物，優(yōu)化反應溫度等溫度參數(shù)，使反應產(chǎn)物更加純凈和特異。
二維梯度PCR的作用特點：
1.提高特異性：通過準確控制退火溫度和變性溫度，使得引物與模板之間的結合更加穩(wěn)定，從而提高了PCR反應的特異性。這有助于減少非特異性擴增和引物二聚體的形成，提高目標DNA片段的產(chǎn)量和純度。
2.優(yōu)化反應條件：能夠在一次實驗中同時優(yōu)化退火溫度和變性溫度，從而找到PCR反應條件。這有助于縮短實驗時間，提高實驗效率。
3.檢測基因點突變：可以根據(jù)已知的突變位點設計適當?shù)囊铮ㄟ^PCR擴增得到目標基因的片段，然后對擴增產(chǎn)物進行測序，檢測突變位點。
4.檢測種群間的遺傳多樣性：通過擴增，產(chǎn)物進行測序，發(fā)現(xiàn)突變位點，比對種群間的遺傳物質多樣性。
二維梯度PCR的測定步驟：
1.準備含有DNA模板、引物、聚合酶和緩沖液等的PCR反應混合液。
2.設定溫度參數(shù)和時間參數(shù)，包括變性溫度、退火溫度、延伸溫度以及每個步驟的時間。
3.將準備好的PCR反應混合液加入到PCR管中，并確保每個管子中的液體量一致。
4.根據(jù)實驗需求，在PCR儀上設置不同的溫度梯度。這通常涉及調整退火溫度和/或延伸溫度，以找到反應條件。
5.啟動PCR儀，按照設定的程序進行PCR反應。在反應過程中，PCR儀會根據(jù)設定的溫度梯度自動調整反應溫度。
6.PCR反應完成后，可以將PCR產(chǎn)物進行電泳分離，通過瓊脂糖凝膠電泳或其他方法檢測和分析PCR產(chǎn)物的大小和純度。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心