背景介紹

裸露的RNA是帶負(fù)電荷的親水性大分子，因?yàn)榧?xì)胞膜的靜電排斥，難以進(jìn)入細(xì)胞，且易被無(wú)處不在的RNA酶快速降解，所以需要保護(hù)性外殼才能進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞膜的組成主要是脂質(zhì)，利用脂質(zhì)囊泡包封RNA穿過(guò)細(xì)胞膜并將RNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。囊泡應(yīng)該是一種帶正電的脂質(zhì)，才能夠結(jié)合帶負(fù)電的RNA。

然而，由永jiu性陽(yáng)離子脂質(zhì)組成的囊泡由于能與帶負(fù)電的細(xì)胞膜發(fā)生靜電作用而引起細(xì)胞毒性，脂質(zhì)結(jié)構(gòu)才能夠?qū)?nèi)體酸性環(huán)境響應(yīng)而帶正電荷的分子。

脂質(zhì)納米粒結(jié)構(gòu)

LNP通常由四種關(guān)鍵成分組成：可離子化的陽(yáng)離子脂質(zhì)、磷脂（兩性離子脂質(zhì)）(PL)、膽固醇和PEG化脂質(zhì)。

脂質(zhì)納米粒遞送機(jī)制

脂質(zhì)納米粒(LNP)作為mRNA的傳遞系統(tǒng)，其作用機(jī)制涉及多個(gè)步驟，確保mRNA安全有效地遞送到目標(biāo)細(xì)胞并表達(dá)蛋白。在LNP中，可電離的陽(yáng)離子脂質(zhì)發(fā)揮著重要作用，因?yàn)樗梢詭д姾傻陀谄銴a以介導(dǎo)在自組裝成LNP期間負(fù)載帶負(fù)電荷的RNA，在中性pH下不帶電以最大限度地減少毒性，并在細(xì)胞吸收后再次帶正電荷以促進(jìn)內(nèi)體逃逸隨著內(nèi)體pH降低。膽固醇和PEG脂質(zhì)的變體已被證明可以調(diào)節(jié)LNP物理性質(zhì)、納米結(jié)構(gòu)和最終功效。兩性離子磷脂通常被稱為“輔助脂質(zhì)”。LNPs在保護(hù)mRNA、促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)傳遞、以及激活免疫反應(yīng)方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。

LNP轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟

下述轉(zhuǎn)染步驟中為6孔板單孔參考條件。對(duì)于其他培養(yǎng)形式，請(qǐng)參考表1。

1、mRNA 預(yù)混液制備

將2.5ug mRNA（濃度為1ug/uL）與60uL Buffer混合。

2、mRNA-easyLNP復(fù)合物

將62.5uL mRNA預(yù)混液與62.5uL easyLNP納米混懸液混合，渦旋2-3s，混勻。

3、加入細(xì)胞

將125uL mRNA-easyLNP復(fù)合物加入細(xì)胞，輕輕晃動(dòng)使均勻分散。

4、分析時(shí)間

培養(yǎng)24-48h后分析。

表1 根據(jù)每孔使用的細(xì)胞培養(yǎng)容器的mRNA轉(zhuǎn)染指南

實(shí)驗(yàn)示意圖：

產(chǎn)品推薦：

Absin產(chǎn)品線：

爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類(lèi)器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...