鎳是地殼中最為常見(jiàn)的金屬元素之一，僅次于鐵。  

許多酶利用鎳作為活性位點(diǎn)的一部分，包括單核（如甘油醛酶I、超氧化物歧化酶）、雙核（如脲酶）或更復(fù)雜的異核簇（如幾種氫化酶和脫氫酶）。我們利用鎳與含有巰基的化合物形成絡(luò)合物的能力，這些化合物在紫外/可見(jiàn)光區(qū)域具有吸收帶。AkrivisBio的鎳檢測(cè)試劑盒是一種簡(jiǎn)單、靈敏的方法，可用于定量檢測(cè)多種樣本類型中的Ni²⁺。由于其他離子也表現(xiàn)出與含硫化學(xué)物質(zhì)相似的行為，因此采用差分吸光度法來(lái)校正干擾物質(zhì)。

艾美捷鎳比色測(cè)定試劑盒：

貨號(hào)：MA-0134

規(guī)格：100孔

樣本類型：包括細(xì)胞和組織培養(yǎng)上清液、尿液、血漿、血清以及許多其他生物液體在內(nèi)的多種樣本。

檢測(cè)方法：比色法，吸光度330納米和405納米

檢測(cè)類型：定量檢測(cè)

應(yīng)用：一種基于微孔板的簡(jiǎn)單、靈敏的比色法檢測(cè)方法，用于在多種樣本中定量檢測(cè)Ni2?，線性檢測(cè)范圍為樣本中2-50納摩爾鎳。

靈敏度：樣本中鎳的線性檢測(cè)范圍為2-50納摩爾。

儲(chǔ)存條件：室溫

運(yùn)輸溫度：室溫

保質(zhì)期：自發(fā)貨之日起一年

鎳比色測(cè)定試劑盒檢測(cè)原理：

在硼酸鹽緩沖液中，鎳與巰基乙醇形成絡(luò)合物，在330納米處產(chǎn)生強(qiáng)烈的吸收帶。如果存在鐵和/或鈷，它們也會(huì)在330納米和405納米處表現(xiàn)出差分吸收，這些吸收用于校正它們的影響。鎂、銅和鋅不會(huì)產(chǎn)生干擾。

檢測(cè)試劑：

-檢測(cè)緩沖液：20毫升  

-鎳試劑：1毫升（綠色）  

-氯化鎳：1毫升（黃色）  

儲(chǔ)存和處理：

-檢測(cè)緩沖液和鎳試劑：即用型，室溫保存。  

-鎳標(biāo)準(zhǔn)品：以1毫摩爾/升溶液形式提供，即用型，室溫保存。

檢測(cè)步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線：在96孔板的一系列孔中分別加入0、10、20、30、40、50微升鎳標(biāo)準(zhǔn)品。用檢測(cè)緩沖液將所有孔的體積調(diào)整至200微升。標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為0、10、20、30、40、50納摩爾鎳。

2. 樣本準(zhǔn)備：鎳的濃度可能變化范圍較廣。加入10-100微升每個(gè)樣本，并用檢測(cè)緩沖液將所有測(cè)試孔的體積調(diào)整至200微升。樣本讀數(shù)應(yīng)位于標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。如果任何樣本超出該范圍，適當(dāng)稀釋并重新檢測(cè)。  

注意：如果樣本中沒(méi)有或極少含有鐵或鈷污染，只需在405納米處讀取吸光度。如果樣本中預(yù)期含有鐵或鈷，需在加入鎳試劑之前和之后，分別在330納米和405納米處讀取樣本吸光度。

3. 讀取1：在加入鎳試劑之前，讀取樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在330納米和405納米處的吸光度。任何吸光度僅由Fe2?和/或試劑背景引起。將這些測(cè)量值分別記作OD3301和OD4051。

4. 絡(luò)合物形成：向所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣本孔中加入10微升鎳試劑，允許30分鐘用于絡(luò)合物形成和顏色發(fā)展。

5. 讀取2：再次讀取所有樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在330納米和405納米處的吸光度。將這些測(cè)量值分別記作OD3302和OD4052。

6. 在沒(méi)有鐵或鈷離子的情況下測(cè)定鎳：從405納米處的讀取2（OD4052）中減去405納米處的讀取1（OD4051）。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（OD/納摩爾）。將樣本的ΔOD405（OD4052 - OD4051）除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以確定鎳的納摩爾數(shù)。

7. 在存在鐵和/或鈷的情況下測(cè)定鎳：從所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣本讀數(shù)中減去0鎳的OD讀數(shù)。

- a. 校正330納米處因鐵引起的干擾：在沒(méi)有巰基乙醇的情況下，330納米處的吸光度（OD3301）僅由Fe2?貢獻(xiàn)。加入含有巰基乙醇的鎳試劑后，Fe2?對(duì)OD3302的貢獻(xiàn)按以下方式計(jì)算：計(jì)算OD3302 = 1.82 × OD3301。從總測(cè)量的OD3302中減去因鐵導(dǎo)致的計(jì)算OD3302值，以獲得因鎳和鈷導(dǎo)致的校正OD330。

- b. 校正405納米處因鐵引起的干擾：在沒(méi)有巰基乙醇的情況下，405納米處的吸光度（OD4051）僅由鐵貢獻(xiàn)。加入含有巰基乙醇的鎳試劑后，鐵對(duì)OD4052的貢獻(xiàn)可以按以下方式計(jì)算：計(jì)算OD4052 = 1.65 × OD4051。從總測(cè)量的OD4052讀數(shù)中減去因鐵導(dǎo)致的計(jì)算OD4052值，以獲得僅因鎳和鈷導(dǎo)致的校正OD405讀數(shù)。

- c. 校正因鈷導(dǎo)致的干擾：計(jì)算校正后的OD330和OD405的比值 =（校正后的OD330/校正后的OD405）。該比值將從100%鈷貢獻(xiàn)吸光度時(shí)的0.925變化到100%鎳貢獻(xiàn)時(shí)的2.8125。從校正后的讀數(shù)比值中減去0.925，并將該結(jié)果除以1.8875，{[（OD330/OD405）- 0.925)]/1.8875}。這就是因鎳導(dǎo)致的吸光度百分比。將該百分比乘以校正后的OD330，以獲得樣本中OD3302處的孤立鎳吸光度。

8.計(jì)算：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（ΔOD405或ΔOD330）。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。計(jì)算步驟6中沒(méi)有鐵或鈷的樣本的樣本鎳讀數(shù)ΔOD405，或步驟7中有鐵和/或鈷干擾的樣本的校正OD330。將校正后的樣本鎳讀數(shù)除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，以確定孔中鎳的納摩爾數(shù)。