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ND2000超微量分光光度計是一種專為微量樣本設(shè)計的分光光度計，可檢測低至1-2μL的核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的濃度和純度。其核心原理基于朗伯-比爾定律（A=εcl），通過測量特定波長（如DNA 260 nm、蛋白質(zhì)280 nm）的光吸收值，計算樣本濃度。其主要由光源、單色器、樣品室、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。光源通常采用氘燈，它能發(fā)出連續(xù)的紫外光譜。單色器（如光柵或棱鏡）用于從光源發(fā)出的廣譜光線中選擇出單一波長的光。樣品室內(nèi)放置了微量樣品池，其路徑長度通常在幾毫米到幾厘米之間，以適應(yīng)微量樣品的測量需求。檢測器則負(fù)責(zé)捕捉經(jīng)過樣品吸收后的光線強(qiáng)度，最后由數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行分析和計算。
ND2000超微量分光光度計的操作指南通常包括以下步驟：
1、儀器準(zhǔn)備
接通電源與預(yù)熱：將超微量分光光度計的電源線插好，打開電源開關(guān)，等待儀器軟件初始化。不同型號的儀器預(yù)熱時間可能有所不同，一般需要預(yù)熱15分鐘至30分鐘，使其溫度穩(wěn)定，確保儀器處于最佳工作狀態(tài)。
清潔樣品池：檢查樣品池是否干凈，如有污染或殘留液體，需用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ?0%乙醇）輕輕擦拭干凈，并用無塵紙擦干。注意避免刮傷樣品池表面。
儀器校準(zhǔn)：使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，校準(zhǔn)操作根據(jù)儀器型號可能有所差異，請參考儀器說明書。這一步是為了確保測量結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
2、設(shè)置測量參數(shù)
選擇測量波長：根據(jù)待測物質(zhì)的特性和實(shí)驗(yàn)要求，選擇合適的測量波長。不同的物質(zhì)在特定波長下有最大吸收峰，選擇該波長可以獲得最佳的測量靈敏度和準(zhǔn)確性。例如，對于DNA的測量，通常選擇260nm和280nm的波長。
確定光程長度：光程長度是指光線通過樣品的距離，一般為1cm。但部分超微量分光光度計的光程較短，如0.5mm、1mm等，具體需根據(jù)儀器型號和樣品特性來確定。
設(shè)定測量模式：常見的測量模式有吸光度模式、濃度模式、透過率模式等。吸光度模式用于直接測量樣品的吸光度值；濃度模式可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動計算樣品的濃度；透過率模式則用于測量樣品的透光率。用戶需根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜆悠非闆r選擇合適的測量模式。
3、樣品測量
空白對照調(diào)零：在進(jìn)行樣品測量之前，通常需要進(jìn)行空白對照調(diào)零，以消除溶劑、比色皿等因素對測量結(jié)果的影響。取適量的空白溶劑（如蒸餾水、緩沖液等），加到檢測基座上，放下樣品臂，浸泡一段時間（如2-3分鐘），然后用無塵紙將檢測基座擦拭干凈。之后點(diǎn)擊調(diào)零按鈕，使儀器以空白溶劑為空白對照進(jìn)行調(diào)零。
加入樣品：將待測樣品用移液器吸取適量，加到檢測基座上。注意加樣時要緩慢、準(zhǔn)確，避免產(chǎn)生氣泡或溢出。對于一些需要稀釋的樣品，應(yīng)先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屘幚?，使其濃度在儀器的線性范圍內(nèi)。
開始測量：放下樣品臂，使樣品與檢測基座充分接觸。然后點(diǎn)擊測量按鈕，儀器將自動記錄并顯示樣品的吸光度值、濃度或其他相關(guān)參數(shù)。測量完成后，屏幕會顯示測量結(jié)果，包括吸光度、濃度、A260/A280比值等信息。
4、數(shù)據(jù)處理與記錄
查看結(jié)果：測量完成后，仔細(xì)查看儀器顯示的測量結(jié)果，確認(rèn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可靠性。如果需要進(jìn)行多次測量，可以記錄每次的測量結(jié)果，并計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。
保存數(shù)據(jù)：將測量結(jié)果保存到計算機(jī)或打印機(jī)中，以便后續(xù)分析和處理。可以使用儀器自帶的軟件或第三方軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。
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