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            化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>解決方案>正文
            
		
            
	
            
	
            
		
            
			
			
            
				
            
					
            
						
            
						
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            耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過(guò)程中的應(yīng)用
            
							
            
								來(lái)源：北京萊伯泰科儀器股份有限公司  
								2025年04月11日 10:48  
                                
    
    
    
        
							
            
						
            
						
            
							
            前言
            在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，C18 96孔板被廣泛應(yīng)用于肽段脫鹽和純化步驟，尤其適用于高通量樣本處理，為下游質(zhì)譜分析提供高質(zhì)量樣本。
             
             
            01

            Empore™ C18 96孔板簡(jiǎn)介
             
            耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過(guò)程中的應(yīng)用
            Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設(shè)計(jì)，板的每個(gè)孔內(nèi)都有一個(gè)有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜，固相萃取膜和其上方的預(yù)過(guò)濾層被壓環(huán)固定到每個(gè)孔的底部，預(yù)過(guò)濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實(shí)際使用直徑。標(biāo)準(zhǔn)板的單孔儲(chǔ)液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲(chǔ)液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過(guò)板的單孔儲(chǔ)液體積，可分批次加液。
            耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過(guò)程中的應(yīng)用
            02

            Empore™ C18 96孔板技術(shù)優(yōu)勢(shì)
             
                  
            • 高通量、低樣本損失、兼容自動(dòng)化設(shè)備。
              •     
            • 致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高。
              •     
            • 薄薄的膜結(jié)構(gòu)更易被洗脫，回收率更高。
            03

            C18 96孔板脫鹽原理
             
            C18鍵合相（十八烷基硅烷）通過(guò)疏水相互作用吸附肽段，去除鹽分、去垢劑等雜質(zhì)，隨后用有機(jī)溶劑洗脫肽段，實(shí)現(xiàn)脫鹽和濃縮。
            04

            實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
             
            1、材料與試劑
                  
            • CDS Empore™ C18 96孔板（貨號(hào)：70-2007-3982-2EA，規(guī)格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS）
              •     
            •     
              緩沖液：
                  
            活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;
            洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;
            洗脫液：0.1% TFA/50-80% ACN（或70% ACN/0.1%甲酸）。
                  
            • 真空抽濾裝置或離心機(jī)（適配96孔板）
              •     
            • 肽段樣本（酶解后的復(fù)雜混合物）
            2、板預(yù)處理
                  
            •     
              活化：每孔加入200μL 100% ACN，靜置1分鐘，抽干。
                  
              •     
            •     
              平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重復(fù)2次，確保填料親水化。
                  
            05

            脫鹽步驟
             
            1、上樣
             
                  
            • 將肽段樣本（溶于0.1% TFA）加入孔中。
              •     
            • 注意：樣本pH需≤3（TFA調(diào)節(jié)），以增強(qiáng)肽段與C18的結(jié)合。
             
            2、洗滌
             
                  
            • 每孔加入200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重復(fù)2-3次，去除鹽分和極性雜質(zhì)。
              •     
            • 真空抽干或離心去除液體。
             
            3、洗脫
             
                  
            • 加入50-100μL洗脫液（如0.1% TFA/50% ACN），靜置1分鐘，收集洗脫液至收集板。
              •     
            • 可重復(fù)洗脫1次以提高回收率。
             
            4、干燥
             
                  
            • 合并洗脫液，真空離心干燥（如SpeedVac）后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液（如0.1%甲酸）。
             
            06

            關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化
             
            1、流速控制
             
                  
            • 手動(dòng)操作時(shí)避免流速過(guò)快（依賴重力或離心）；自動(dòng)化平臺(tái)可調(diào)至1mL/ min。
             
            2、有機(jī)相比例
             
                  
            • 洗脫ACN濃度需優(yōu)化（通常50-80%），過(guò)高可能導(dǎo)致疏水性雜質(zhì)共洗脫。
             
            3、樣本載量
             
                  
            • 避免超載（肽段載量：100μg左右/孔），否則會(huì)導(dǎo)致回收率低。
             

            07

            應(yīng)用場(chǎng)景
             
            1、質(zhì)譜前處理
             
                  
            • 去除LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS、尿素、磷酸鹽）。
             
            2、分級(jí)洗脫
             
                  
            • 與高pH反相分餾聯(lián)用，提高肽段覆蓋度。
             
            3、自動(dòng)化整合
             
                  
            • 適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實(shí)現(xiàn)高通量。
             
             
             
            
						
            
					
            
										
										
            
						
						  
            
							
            免責(zé)聲明
            
						  
            
						  
              
							
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