全自動(dòng)凱氏定氮儀的操作步驟一般如下:
1、前期準(zhǔn)備
檢查儀器:確保儀器各部件連接正常,無(wú)損壞,管路無(wú)堵塞、漏氣等情況。
試劑準(zhǔn)備:配置好消化試劑(如濃硫酸、催化劑等)、堿液(如氫氧化鈉溶液)、吸收液(如硼酸溶液)等,并準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)酸溶液用于滴定。
樣品處理:稱取適量具有代表性的樣品,一般準(zhǔn)確到0.0001g。對(duì)于固體樣品,需粉碎均勻;對(duì)于液體樣品,要充分混合。將稱好的樣品放入消化管中。
2、消化
添加試劑:向消化管中加入適量的消化試劑,如濃硫酸和催化劑(如硫酸銅、硫酸鉀等)。催化劑可加快消化速度,使樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)銨鹽。
消化樣品:將消化管放在消化爐上,按照設(shè)定的程序進(jìn)行消化。一般先以較低溫度加熱,避免反應(yīng)過(guò)于劇烈,然后逐漸升高溫度至380-420℃左右,直至消化液呈透明藍(lán)綠色,且冒白煙,表明消化。消化時(shí)間根據(jù)樣品的類型和含量不同而有所差異,一般為0.5-4小時(shí)不等。
3、蒸餾
安裝消化管:消化完成后,待消化管冷卻至室溫,將其安裝在全自動(dòng)凱氏定氮儀的蒸餾裝置上。
添加堿液:通過(guò)儀器的加液裝置向消化管中加入過(guò)量的堿液,使銨鹽轉(zhuǎn)化為氨氣。
蒸餾:?jiǎn)?dòng)蒸餾程序,儀器會(huì)自動(dòng)加熱產(chǎn)生水蒸氣,水蒸氣將氨氣帶入到裝有吸收液的接收瓶中。氨氣被吸收液吸收,形成銨鹽。蒸餾過(guò)程一般持續(xù)5-15分鐘,具體時(shí)間根據(jù)樣品的含氮量和儀器的性能而定。
4、滴定
準(zhǔn)備滴定:蒸餾結(jié)束后,接收瓶中的吸收液含有被吸收的氨氣,以甲基紅-溴甲酚綠為指示劑,用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液進(jìn)行滴定。
滴定操作:將標(biāo)準(zhǔn)酸溶液裝入滴定管中,開(kāi)始滴定接收瓶中的吸收液。當(dāng)溶液的顏色由綠色變?yōu)榘导t色時(shí),即為滴定終點(diǎn)。記錄消耗的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的體積。
5、結(jié)果計(jì)算
根據(jù)滴定消耗的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液的體積、濃度以及樣品的質(zhì)量,按照凱氏定氮法的計(jì)算公式計(jì)算樣品中的氮含量,再根據(jù)不同樣品的換算系數(shù),將氮含量換算為蛋白質(zhì)含量。
6、清洗與關(guān)機(jī)
清洗儀器:滴定結(jié)束后,及時(shí)清洗儀器的各個(gè)部件,包括消化管、蒸餾裝置、接收瓶等,防止殘留的試劑對(duì)儀器造成腐蝕。一般先用蒸餾水沖洗,再用去離子水沖洗干凈。
關(guān)閉儀器:清洗完成后,關(guān)閉儀器電源,排空儀器中的液體,做好儀器的維護(hù)和保養(yǎng)工作,以便下次使用。
不同型號(hào)和品牌的全自動(dòng)凱氏定氮儀在具體操作上可能會(huì)有一些差異,使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
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