隨著基因編輯技術(shù)的飛速發(fā)展，CRISPR-Cas9、TALEN、ZFN等工具已成為生命科學(xué)領(lǐng)域的核心利器。然而，基因編輯的成功與否，關(guān)鍵在于編輯效率的準(zhǔn)確評估。如何快速、高效地檢測基因編輯的效率，成為了科研人員面臨的重要挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的檢測方法如測序等雖然準(zhǔn)確，但耗時長、成本高，難以滿足高通量篩選的需求。因此，開發(fā)一種快速、簡便的檢測方法成為了當(dāng)務(wù)之急。在這一背景下，T7核酸內(nèi)切酶 I（T7 Endonuclease I）憑借其高靈敏度、快速反應(yīng)和操作簡便的特點(diǎn)，成為評估CRISPR-Cas9等基因編輯工具效率的理想選擇。

T7 Endonuclease I是一種來源于T7噬菌體的核酸酶，能夠識別并切割不全配對的DNA、十字形結(jié)構(gòu)DNA、Holliday結(jié)構(gòu)或交叉DNA、異源雙鏈DNA，也能以較慢速度切割帶切刻的雙鏈DNA，切割位點(diǎn)位于錯配堿基5′端的第一、第二或第三個磷酸二酯鍵。其應(yīng)用于基因編輯效率檢測的作用機(jī)制如下：當(dāng)基因編輯后，目標(biāo)位點(diǎn)會形成含有錯配堿基的DNA雙鏈（如插入、缺失或點(diǎn)突變），T7 Endonuclease I能夠識別這些錯配位點(diǎn)，并在其附近進(jìn)行切割，產(chǎn)生特定長度的DNA片段。

圖1.T7 Endonuclease I結(jié)構(gòu)及作用過程示意圖[1]

使用翌圣和來自進(jìn)口Supplier A*的T7 Endonuclease I分別與含有錯配堿基的dsDNA底物進(jìn)行孵育，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析譜帶變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，翌圣20 U的T7 Endonuclease I能有效切割200 ng含有錯配堿基的dsDNA，且切割效果媲美來自進(jìn)口Supplier A*的T7 Endonuclease I。

圖2.T7 Endonuclease I切割效果驗(yàn)證（注：底物投入量-200ng）

參考文獻(xiàn)

[1] Déclais A C, Hadden J, Phillips S E V, et al. The active site of the junction-resolving enzyme T7 endonuclease I[J]. Journal of molecular biology, 2001, 307(4): 1145-1158.

[2] Babon J J , Mckenzie M , Cotton R G H .The Use of Resolvases T4 Endonuclease VII and T7 Endonuclease I in Mutation Detection[J].Molecular Biotechnology, 2003, 23(1):73-81.DOI:10.1385/MB:23:1:73.

[3] Kazuki M , Shouta U , Junpei Y ,et al.Structure-specific DNA endonuclease T7 endonuclease I cleaves DNA containing UV-induced DNA lesions[J].The Journal of Biochemistry, 2024(1):1.DOI:10.1093/jb/mvae024.