背景

PD-L1蛋白在腫瘤細(xì)胞或腫瘤微環(huán)境（TME）中的高表達(dá)已被確定為預(yù)測(cè)免疫治療療效的生物標(biāo)志物，并被FDA批準(zhǔn)為各種實(shí)體瘤開(kāi)始治療的指標(biāo)。然而，沒(méi)有證據(jù)表明循環(huán)PD-L1表達(dá)是否與組織PD-L1表達(dá)一致，以及循環(huán)PD-L1水平是否能預(yù)測(cè)組織PD-L1表達(dá)。由于分離過(guò)程復(fù)雜，臨床樣本中EV外泌體生物標(biāo)志物的鑒定和定量仍然具有挑戰(zhàn)性。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)評(píng)估外泌體需要在檢測(cè)前分離外泌體，這在臨床環(huán)境中是不可行的。相比之下，Simoa®平臺(tái)可能提供一種超靈敏、無(wú)創(chuàng)、全自動(dòng)和高通量EV檢測(cè)，具有雙EV生物標(biāo)志物靶向特征。我們開(kāi)發(fā)了基于Simoa®技術(shù)的PD-L1 + EV檢測(cè)測(cè)定法，并確定了T-EVs 與腫瘤組織之間PD-L1 表達(dá)的顯著相關(guān)性。

方法

含有EV的樣品與包被有捕獲Epcam抗體的磁珠一起孵育。將磁珠-EV復(fù)合物與生物素化的PD-L1檢測(cè)抗體和SBG依次孵育，然后加載到Simoa光盤上。SBG與 RGP的催化反應(yīng)在微孔中受到限制。如果將磁珠-EV-檢測(cè)抗體-SBG復(fù)合物加載到孔中，該儀器會(huì)檢測(cè)到熒光信號(hào)增加。

圖1. 用于檢測(cè)EV的Simoa免疫測(cè)定法的原型

結(jié)果

TPS臨界值比較了表達(dá)PD-L1的患者和不表達(dá)PD-L1的患者之間的Epcam-PD-L1 水平，當(dāng)TPS截止值設(shè)置為10%時(shí)，觀察到最高的AUC。在此臨界值下，陽(yáng)性樣品中的Epcam-PD-L1 EV水平顯著升高。此外，Epcam-PD-L1 EV水平與每位患者的TPS 乘以腫瘤體積的相關(guān)性較高。

圖2. Epcam-PD-L1 EV信號(hào)在PD-L1高表達(dá)樣本中(TPS>10%）濃度較高(左圖)；Epcam-PD-L1 EV信號(hào)與TPS*Vol之間呈現(xiàn)較強(qiáng)相關(guān)性（右圖）

結(jié)論

根據(jù)我們的結(jié)果，Simoa®原型檢測(cè)特定來(lái)源的細(xì)胞外囊泡，可能提供一種無(wú)創(chuàng)和動(dòng)態(tài)的方法來(lái)監(jiān)測(cè)接受免疫治療的患者的腫瘤PD-L1表達(dá)。