1 前言

在微生物學(xué)研究中，培養(yǎng)基扮演著至關(guān)重要的角色，它為微生物的生長提供了一個可靠的環(huán)境，是其生長繁衍的營養(yǎng)基質(zhì)。其中，不含凝固劑（如瓊脂）、呈液體狀態(tài)的培養(yǎng)基，我們稱為液體培養(yǎng)基；呈固體狀態(tài)的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基。向液體培養(yǎng)基中加入瓊脂后制成的瓊脂固體培養(yǎng)基，是我們在實(shí)驗(yàn)室中最經(jīng)常用的培養(yǎng)基之一，微生物在固體培養(yǎng)基的表面可形成肉眼可見的菌落。今天我們就來聊聊固體培養(yǎng)基的配制及儲存注意事項(xiàng)。
 

2 固體培養(yǎng)基的配制

首先，我們需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適合的固體培養(yǎng)基配方。常見的固體培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂、LB培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂等。每種培養(yǎng)基都有其特定的應(yīng)用場景，下面我們簡單羅列了一些常用的固體培養(yǎng)基的配方及適用場景，供大家參考。

選擇好合適的培養(yǎng)基之后，我們再按照選定的配方準(zhǔn)確稱量所需的物質(zhì)成分。精確的稱量對于確保培養(yǎng)基的質(zhì)量至關(guān)重要，但我們再稱取肯定不能一把就稱到準(zhǔn)確的重量，通常來說，稱取的克重可以大一丟丟，但絕對不能小，因?yàn)槲覀冊诩尤氲藉F形瓶里時不可避免地會有一些粉末殘留在稱量盤上，所以稍微大一點(diǎn)沒關(guān)系，但絕對不能小于所需克重，因?yàn)橐_保微生物生長所需要的營養(yǎng)條件足夠。
 

例如，要稱取5g的成分的話，5.1g～5.2g之間的任何值都被視為符合要求。但對于一些微量成分，建議使用能夠精確到0.001g或者更高精度的天平，并且盡可能減少操作誤差，以保證微量成分的準(zhǔn)確性。
 

以LB培養(yǎng)基為例，一般建議在一個稱量盤中依次稱量不同的成分，每稱完一個成分就歸零，向同一個稱量盤內(nèi)加入下一個成分進(jìn)行稱量。這還是因?yàn)槲覀冊趯⒎勰┘尤氲藉F形瓶里時，會有一些粉末殘留在稱量盤上。如果你用不同的稱量盤分別稱量那么誤差就會變大，用同一個稱量盤稱量就能減小這部分誤差。
 

稱完后，我們一般先往錐形瓶的瓶底，加一點(diǎn)點(diǎn)水，再加入稱好的粉末，避免粉末直接加到瓶內(nèi)后會飛散。加入粉末后，搖勻，接著在定容至目標(biāo)體積（需要注意的是，錐形瓶內(nèi)的液體總體積不能超過容量的2/3）。然后在瓶口處蓋上一張培養(yǎng)基封口膜，用橡皮筋固定住，再在外面覆蓋上一層錫箔紙。

做完上面這些步驟我們就可以將配好的培養(yǎng)基放到高壓滅菌鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌啦！
 

滅完菌，待培養(yǎng)基稍稍冷卻之后，我們就可以準(zhǔn)備倒平板了，具體的溫度大約是50°C我們可以試著用手去摸瓶壁，摸著稍稍燙手即可。然后在超凈臺內(nèi)，迅速倒入無菌的培養(yǎng)皿中，倒入的量不必精確，但要確保覆蓋整個皿的底面，對于標(biāo)準(zhǔn)尺寸的培養(yǎng)皿來說，大約是20mL。
 

培養(yǎng)基冷卻后，它就會凝固并變成不透明的，但所有凝固完需要的時間一般會比較久。一般倒完平板后就放在超凈臺內(nèi)，開抽風(fēng)，不要開紫外，玻璃擋板留一小條縫，放置過夜。最好寫一張便簽貼，標(biāo)明一下你在冷卻平板，貼在超凈臺明顯的位置，防止有些同學(xué)不知道，誤用了你在晾平板的超凈臺，導(dǎo)致你的平板受到污染。
 

平板冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒置過來，以防止在瓊脂表面凝結(jié)。然后將倒置的培養(yǎng)基裝進(jìn)大小合適的保鮮袋內(nèi)，并在保鮮袋上標(biāo)記好對應(yīng)培養(yǎng)基的名稱及配制日期，放入4℃冰箱保存即可。

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