Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用戶指南

——精準(zhǔn)定量細(xì)胞凋亡抑制因子的科研利器

一、產(chǎn)品概述

Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 是基于雙抗體夾心法（Sandwich ELISA）的定量檢測試劑盒，專為科研單位設(shè)計，用于 人血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及尿液 中細(xì)胞凋亡抑制因子（IAP）的精準(zhǔn)定量分析。該試劑盒通過 高效、靈敏、特異的抗體 結(jié)合酶聯(lián)反應(yīng)，生成與目標(biāo)蛋白濃度成正比的顏色信號，支持 0.2 IU/L 至 6 IU/L 的檢測范圍，靈敏度達(dá) 3 pg/mL（具體批次可能略有差異）。

二、核心組件與參數(shù)

三、技術(shù)優(yōu)勢

1. 高效靈敏

• 采用 高效價、高特異性抗體，檢測限低至 3 pg/mL，確保低豐度蛋白的精準(zhǔn)捕獲。

• 重復(fù)性 CV% < 9%（批內(nèi)） 和 < 11%（批間），保證實(shí)驗結(jié)果穩(wěn)定性。

2. 廣泛適用性

• 支持多種樣本類型，包括 血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及尿液，滿足不同研究需求。

• 吸附性能優(yōu)異，固相載體空白值低，孔底透明度高，確保顯色均勻。

3. 節(jié)省成本

• 預(yù)包被板設(shè)計減少人工包被步驟，降低操作難度與試劑消耗。

• 試劑盒提供 48 孔或 96 孔 兩種規(guī)格，適配不同實(shí)驗規(guī)模。

四、操作流程

（一）樣本準(zhǔn)備

1. 血清/血漿

• 室溫靜置 10-20 分鐘使血液自然凝固，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清。

• 如需長期保存，分裝后置于 -20℃ 或 -70℃，避免反復(fù)凍融。

2. 組織勻漿液

• 切割組織后，按 1:10（w/v） 加入 PBS（pH 7.4），勻漿后 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)上清液

• 直接收集上清，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片。

（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建

1. 將標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行 2 倍梯度稀釋，得到 1800、1200、600、300、150 ng/L 的濃度梯度。

2. 在酶標(biāo)包被板上設(shè)置 10 個標(biāo)準(zhǔn)孔，每孔加入 50 μL 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品。

（三）加樣與孵育

1. 在待測樣品孔中加入 40 μL 樣品稀釋液 和 10 μL 樣本（稀釋 5 倍）。

2. 每孔加入 50 μL 酶標(biāo)試劑，空白孔僅加稀釋液與酶標(biāo)試劑。

3. 用封板膜密封后，37℃ 孵育 30 分鐘。

（四）洗滌與顯色

1. 棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù) 5 次。

2. 每孔加入 50 μL 顯色劑 A 和 B，輕輕震蕩混勻，37℃ 避光顯色 15 分鐘。

3. 每孔加入 50 μL 終止液，立即在 450 nm 波長 下測定 OD 值。

（五）結(jié)果計算

1. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 根據(jù)樣品 OD 值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算實(shí)際濃度，再乘以稀釋倍數(shù)（5 倍）。

五、應(yīng)用場景

1. 細(xì)胞凋亡機(jī)制研究

• 定量分析不同處理條件下 IAP 表達(dá)變化，揭示凋亡調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

2. 腫瘤生物學(xué)研究

• 評估 IAP 在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平，探索其作為治療靶點(diǎn)的潛力。

3. 藥物研發(fā)

• 檢測藥物對 IAP 表達(dá)的調(diào)控作用，輔助抗凋亡藥物的篩選與優(yōu)化。

4. 疾病診斷

• 分析 IAP 在血清或組織中的異常表達(dá)，輔助相關(guān)疾病的早期診斷。

六、注意事項

1. 樣本質(zhì)量

• 避免使用溶血、脂血或高濃度 NaN? 的樣本，以免干擾檢測結(jié)果。

2. 操作規(guī)范

• 加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)，避免因孵育時間差異導(dǎo)致誤差。

• 顯色反應(yīng)需在 加終止液后 15 分鐘內(nèi) 完成測定。

3. 試劑保存

• 未開封試劑盒需置于 2-8℃ 保存，開封后未用完的板條需密封保存。

• 濃縮洗滌液在低溫下可能結(jié)晶，使用前需 水浴加溫助溶。