人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）ELISA試劑盒使用說明書
　　本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
　　　本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）含量。
實驗原理
　　　本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）水平。用純化的人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）標(biāo)準品和未知濃度的α-BGT待檢樣品，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準曲線計算樣品中人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）濃度。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶  
 
人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）ELISA試劑盒使用說明書
9 標(biāo)準品S1（180 ng/L） 0.5ml×1瓶
2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1瓶  標(biāo)準品S2（120 ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條  標(biāo)準品S3（60 ng/L） 0.5ml×1瓶
4 生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體 6ml×1瓶  標(biāo)準品S4（30 ng/L） 0.5ml×1瓶
5 顯色劑A液 6ml×1瓶  標(biāo)準品S5（15ng/L） 0.5ml×1瓶 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1個
7 終止液 6ml×1瓶 11 封板膜 3張
8 樣品稀釋液 6ml×1瓶 12 說明書 1份
 
標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
2． 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品，其余各步操作相同）、標(biāo)準品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準品孔中加入標(biāo)準品50μl，在樣本反應(yīng)孔中先加入待測樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl（樣品zui終稀釋度為5倍），蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
3． 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4． 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)4次，拍干。
5． 加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6． 洗滌：操作同4。
7．加鏈霉親和素-HRP：每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
8． 洗滌：操作同4。
9．顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10．終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11．測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
 
計算
　　  以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值待入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
人α-銀環(huán)蛇毒素（α-BGT）ELISA試劑盒使用說明書
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．  如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。
5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
線形范圍：
　　10ng/L-200ng/L
規(guī)格：
　　96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
小鼠脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉（DPD）ELISA試劑盒
小鼠吡啶交聯(lián)物（PY）ELISA試劑盒
小鼠骨橋素（OPN）ELISA試劑盒
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