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            小鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒

            來源:北京索萊寶科技有限公司   2012年08月24日 10:10  

            小鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒

            特異性:  沒有檢測到與任何其他細胞因子的交叉反應性。
            儲存:       存放在4 ℃ 的頻繁使用,在-20 ℃ 很少使用。  避免多次凍融循環(huán)(隨用濕冰)
            有效期: 4個月,在4 ℃ 和8個月,在-20 ℃ 。
            應用:  用于定量檢測小鼠脂聯(lián)素,血清,血漿,體液,組織裂解物或細胞培養(yǎng)上清。
            注意事項應用套件
            1 。在使用試劑盒,旋轉管到管底,并關閉所有元件。
            2 。重復以及檢測標準和樣品測試。
            3 ,不要讓96孔板中干,干板將活性成分失活板。
            4 。為了避免邊際效應的板孵化,由于溫度差(反應可能會更強的邊際井),ABC和TMB的解決方案攤薄預先加熱,在37 ℃ 30分鐘前使用。
            工具包組件
            1。凍干重組小鼠脂聯(lián)素標準:10ng/tube×2。
            2。一個96孔板預涂與抗小鼠脂聯(lián)素抗體。
            3。樣品稀釋緩沖液:30毫升
            4。生物素標記的抗小鼠脂聯(lián)素抗體130μl稀釋1:100。
            5??贵w稀釋緩沖12毫升。:
            6。親和素 - 過氧化物酶復合物(ABC):130μl稀釋1:100。
            7。ABC稀釋劑的緩沖區(qū):12毫升。
            8。TMB顯色劑:10毫升。
            9。TMB一站式解決方案:10毫升。
             
            材料需要但不提供:
            1。酶標儀標準尺寸。
            2。自動洗板機。
            3??烧{式移液器及吸頭。多道移液器建議中的條件在檢測大量的樣品。
            4。清潔管和Eppendorf管中。
            5。洗滌緩沖液(中性PBS或TBS)。 
            0.01M TBS的制備:添加1.2克的Tris8.5克氯化鈉;450μl純化的乙酸或700μl濃鹽酸1000ml H 2 Ø,并調節(jié)pH值7.2-7.6。后,調整1L總體積。
            下游的0.01M PBS:上傳8.5克氯化鈉,1.4克的Na 2 HPO 4 和0.2g的NaH 2 PO 4 1000ml蒸餾水,并調節(jié)pH值7.2-7.6。后,調整1L總體積。
            實驗步驟
            ABC工作液和TMB彩色顯影劑必須在使用前30分鐘在37℃下保溫。稀釋樣品和試劑時,必須將它們*和均勻地混合。標準小鼠脂聯(lián)素檢測曲線。用戶將決定樣品稀釋倍數(shù)的粗略的估計。
            1。的分裝0.1毫升每20ng/ml,10ng/ml時,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml,0.625ng/ml,0.312 ng / ml的小鼠脂聯(lián)素標準的解決方案,預涂96板。添加0.1ml的樣品稀釋緩沖液到控制(零井)。添加0.1ml的每個適當稀釋的人血清樣品,血漿,體液,組織裂解物或細胞培養(yǎng)上清液中的每個空井。請參見“示例稀釋指引“上面的內容,我們建議每個小鼠脂聯(lián)素標準溶液和每個樣品一式兩份測定。
            2。密封板與蓋和在37℃下孵育90分鐘。
            3。取下蓋子,舍棄板的內容,涂抹到紙巾或其它吸水材料板。不要讓我們的井*干燥,在任何時候。
            4。添加生物素標記的抗0.1ml的 孵化板在37℃下60分鐘。
            5。三次用0.01M TBS或0.01M PBS洗板,每一次讓留在洗滌緩沖液井1分鐘。棄去洗滌液,或其他吸水紙巾上吸干板材料。
            6。導入各孔中,并加入0.1ml的制備ABC工作液,在37℃下孵育板30分鐘。
            7。將板洗滌5次,用0.01M TBS或0.01M PBS,每一次讓洗滌緩沖液的孔中逗留1-2分鐘。棄去洗滌液和紙巾或其它吸水材料上涂抹板。
            8。90微升制備TMB底彩色顯影劑添加到每個孔中并孵育板在37℃下20分鐘(深淺不一的藍,可以看出,在井的四個集中的脂聯(lián)素標準的解決方案;其他井沒有明顯的顏色)。
            9。每孔加入0.1ml的準備TMB的一站式解決方案。顏色立即變成黃色。
            10。閱讀的OD在酶標儀在450nm處的吸光度,添加停止溶液后,在30分鐘之內。
            為了計算,(相對OD 450 )=(的OD 450 ) - (的OD 450 )??梢岳L制成的相對OD 標準曲線。的小鼠脂聯(lián)素濃度的樣品可以被內插。      
             
            注:如果測量的樣品進行稀釋,稀釋前,乘以稀釋倍數(shù)的濃度插值獲得的濃度。
            摘要
            1。加入樣品和標準品,并在37℃下孵育板90分鐘。不要洗。
            2。添加生物素化的抗體,并在37℃下孵育板60分鐘。將板洗滌3次,用0.01MTBS。
            3。加入ABC工作液,并在37℃下孵育板30分鐘。將板洗滌5次,用0.01MTBS。
            4。加入TMB底彩色顯影劑,并在37℃下孵育板20分鐘。
            5。加入TMB一站式的解決方案和閱讀。
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