一、基本原理
*部分：SDS-PAGE 電泳
1、蛋白中含有很多的氨基（+）和羧基（-），不同的蛋白在不同的PH值下表現(xiàn)出不同的電荷，
為了使蛋白在電泳中的遷移率只與分子量有關(guān)，我們?cè)谏蠘忧?，通常?huì)進(jìn)行一些處理（上樣
緩沖液）。即在樣品中加入含有SDS 和β-巰基乙醇的上緩沖液。SDS 即十二烷基磺酸鈉
（CH3-（CH2）10-CH2OSO3- Na+），是一種陰離子表面活性劑，它可以斷開分子內(nèi)和分子間的
氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)； β-巰基乙醇是強(qiáng)還原劑，它可以斷開半胱氨酸
殘基之間的二硫鍵。電泳樣品加入樣品處理液后，經(jīng)過高溫處理，其目的是將SDS 與蛋白質(zhì)
充分結(jié)合，以使蛋白質(zhì)*變性和解聚，并形成棒狀結(jié)構(gòu)同時(shí)使整個(gè)蛋白帶上負(fù)電荷；另外
樣品處理液中通常還加入溴酚藍(lán)染料，用于監(jiān)控整個(gè)電泳過程；另外樣品處理液中還加入適
量的蔗糖或甘油以增大溶液密度，使加樣時(shí)樣品溶液可以快速沉入樣品凹槽底部。當(dāng)樣品上
樣并接通兩極間電流后（電泳槽的上方為負(fù)極，下方為正極），在凝膠中形成移動(dòng)界面并帶動(dòng)
凝膠中所含SDS負(fù)電荷的多肽復(fù)合物向正極推進(jìn)。樣品首先通過高度多孔性的濃縮膠，使樣
品中所含SDS 多肽復(fù)合物在分離膠表面聚集成一條很薄的區(qū)帶（或稱積層）。
2、電泳啟動(dòng)時(shí)，蛋白樣品處于PH6.8 的上層，PH8.8 的分離膠層在下層，上槽為負(fù)極，下
槽為正極。出現(xiàn)了PH 不連續(xù)和膠孔徑大小不連續(xù)：啟動(dòng)時(shí)Cl¯解離度大，Pro¯解離度居中，
甘aaCOO¯解離度小，遷移順序?yàn)椋≒H6.8）Cl¯> Pro¯ >—COO¯。在Cl¯與Pro¯之間和Pro¯與—COO¯之間都將出現(xiàn)低離子區(qū)，同時(shí)也出現(xiàn)高電勢(shì)，高電勢(shì)迫使Pro¯向Cl¯遷移，—COO¯
向Pro¯遷移。如：一個(gè)Cl¯領(lǐng)路，—COO¯推動(dòng)，蛋白在中間，這樣就起到濃縮的作用了。
在濃縮膠運(yùn)動(dòng)中，由于膠聯(lián)度小，孔徑大，Pro¯受阻小，因此不同的蛋白質(zhì)就濃縮到分離膠
之上成層，起濃縮效應(yīng)，使全部蛋白質(zhì)處于同一起跑線上。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)進(jìn)入分離膠時(shí)，此時(shí)
Pro¯，Cl¯，甘aa 離子在PH8.8 的溶液中，Cl¯*電離而很快到達(dá)正極，甘aa 電離度加大
很快躍過蛋白質(zhì)，而到達(dá)正極，只有蛋白質(zhì)分子在分離膠中較為緩慢的移動(dòng)。由于Pro¯在
電泳過程中，受到溶液離子的變化而PH 值發(fā)生變化，但每一瞬間，其所帶電荷數(shù)除以單位質(zhì)量是不同的，所以帶負(fù)電荷多者遷移快，反之則慢，這就現(xiàn)了電荷效應(yīng)。由于膠孔徑小，
而且成為一個(gè)整體的篩狀結(jié)構(gòu)，它們對(duì)大分子阻力大，小分子阻力小，起著分子篩效應(yīng)，也
就是蛋白質(zhì)在分離膠中，以分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)而出現(xiàn)遷移率的差異，zui終達(dá)到彼此分開。