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            人晚期氧化蛋白產物(AOPP)定量檢測試劑盒(ELISA)

            來源:上海博耀生物科技有限公司   2012年11月26日 09:33  

             

            僅供科研使用,不得用于醫(yī)學診斷。
            使用前仔細閱讀本說明書。
             
                用于定量檢測人血清、血漿及相關液體樣本中晚期氧化蛋白產物(AOPP的含量。
            工作原理
            本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測定樣品中人晚期氧化蛋白產物(AOPP的水平。向預先包被人晚期氧化蛋白產物(AOPP抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的晚期氧化蛋白產物(AOPP抗體,經過溫育和洗滌,去除未結合的組分,然后再加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人晚期氧化蛋白產物(AOPP的濃度呈正相關。
            試劑盒組成

            1
            標準品(400ng/ml)
            0.5ml
            7
            顯色劑A液
            6ml
            2
            標準品稀釋液
            6mL
            8
            顯色劑B液
            6ml
            3
            酶標包被板
            12孔×8條
            9
            終止液
            6ml
            4
            酶標試劑
            6ml
            10
            說明書
            1份
            5
            20×濃縮洗滌液
            20ml
            11
            封板膜
            2張
            6
            樣品稀釋液
            6ml
            12
            密封袋
            1個

            注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:400、200100、50、25、0 ng/ml
            需要而未提供的試劑和器材
            1. 37恒溫箱。
            2. 標準規(guī)格酶標儀。
            3. 精密移液器及一次性吸頭
            4. 蒸餾水,
            5. 一次性試管
            6. 吸水紙
            注意事項
            1. 2-8取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
            2. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差
            3. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
            4. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
            5. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
            6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
            7. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
            洗板方法
            手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過程數次。
            自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
             
            標本要求
            1不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
            2標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融
            操作程序
            1. 分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37溫育60分鐘。
            2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
            3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
            4. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
            5. 測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
            6. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。
            操作程序總結
            準備試劑,樣品和標準品
             


             

            加入準備好的樣品、標準品和酶標試劑,37反應60分鐘
             
            洗板5次,加入顯色液AB,37顯色15分鐘
             
            加入終止液
             
            15分鐘之內讀OD
             
            計算
             
            檢測范圍:6.25 ng/ml -400ng/ml
            規(guī)格:    96T/
            保存:    2-8
            有效期: 6個月(2-8)。
             

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