免疫學(xué)檢測法的基本原理是細胞因子(或受體)與相應(yīng)的特異性抗體(單克隆抗體或多克隆抗體)結(jié)合,通過同位素、熒光或酶等標(biāo)記技術(shù)加以放大和顯示,從而定性或定量顯示細胞因子(或受體)的水平。這類方法的優(yōu)點是實驗周期短,少受抑制物或相似生物池功能因子的干擾,如抗體的特異性高可區(qū)分不同型或亞型的細胞因子(如IFN),一次能檢測大量標(biāo)本,易標(biāo)準(zhǔn)化。與生物學(xué)活性檢測方法相比,免疫學(xué)檢測法在許多情況下敏感性低于前者,所得結(jié)果不表示生物學(xué)活性,有的McAb只能識別重組的細胞因子,在檢測天然的細胞因子中受到限制。
免疫學(xué)檢測法多采用ELISA和RIA法,可以分為平心法、競爭法和間接法。
?。ㄒ唬〦LISA(或RIA)平心法
根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同可有以下幾種不同的平心法ILISA。
1.PcAb與McAb夾心法 用純化的多克隆抗體(PcAb)包被板子,加待檢細胞因子(或可溶性受體)和標(biāo)準(zhǔn)品,上層加酶標(biāo)記的McAb。有時為了增加敏感性,上層加McAb后再用酶標(biāo)記第二抗體顯色。
2.McAb與PcAb夾心法 用McAb包被板子,加待檢樣品,上層加酶標(biāo)記的PcAb。有時為了增加敏感性,上層加PcAb后再用釗對PcAb的酶標(biāo)記抗抗體。
3.雙McAb夾心法 選擇和應(yīng)用識別同一個細胞因子(或受體)分子上不同表位的兩種McAb,其中一種包被板子,另一種McAb標(biāo)記酶。由于單克隆抗體親和力識別表位地勻一,從質(zhì)量控制角度來看,一般比上兩種夾心法易控制。如目前已商品化檢測細胞因子(或其受體)的檢測盒大多采用雙單克隆抗體夾心法。
4.細胞、McAb夾心法 用表達IL-2R的MT-1細胞包被板子,加入待檢IL-2或標(biāo)準(zhǔn)品,上層加125I標(biāo)記的McAb,根據(jù)γ計數(shù)cpm值推算出待檢IL-2含量。
?。ǘ└偁幏?/p>
有報道用況爭法檢測IL-2水平。用免抗IL-2PcAb包袱板子,同時加入125I標(biāo)記的IL-2和待測IL-2,根據(jù)γ計數(shù)cpm值得知待檢IL-2對125I-IL-2與PcAb競爭結(jié)合的程度,從而推算出待測標(biāo)本IL-2的含量。這種方法檢測IL-2的敏感性可達50pg/ml。
為了增加敏感性,在上述系統(tǒng)中可再連接上生物素,再用鏈霉親和素(streptavidin)酶標(biāo)記物進行放大。此外,還可用化學(xué)發(fā)光、改進顯色底物等措施提高檢測方法的敏感性。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。