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            IgM捕捉ELISA法

            來(lái)源:上海索寶生物科技有限公司   2009年12月30日 09:26  

             

            IgM捕捉ELISA法(MacELISA)檢測(cè)出血熱IgM抗體
            本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體,加辣根過(guò)氧化物酶-病毒抗原標(biāo)記物,用以檢測(cè)出血熱特異性IgM抗體。具有較高的敏感性、特異性和重復(fù)性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實(shí)驗(yàn)性研究。本試劑盒為96人份/包裝。
            試驗(yàn)材料:
            (1)抗人IgM抗體(μ鏈):用pH9.5的包被液包被酶標(biāo)板
            (2)凍干陽(yáng)性血清/凍干陰性血清1支, 0.2ml/支,工作濃度為1:10;
            (3)凍干辣根過(guò)氧化物酶-病毒抗原標(biāo)記物1支, 0.5ml/支,工作濃度為1:20;
            (4)凍干小牛血清1支,1ml/支;
            (5)濃縮洗液(10倍濃縮)1瓶,50ml;(標(biāo)本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液);
            (6)A/B顯色液和終止液各1瓶。
            (凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解,然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀釋使用,余下的放-20℃保存)
            (7)終止液:4N H2SO4
            (8)酶標(biāo)儀。
            檢測(cè)步驟
            (1)將待檢血清用稀釋液100倍稀釋,加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標(biāo)板一孔中,100μl/孔,同時(shí)加入已1:10稀釋的陽(yáng)性血清/陰性血清對(duì)照各一孔,100μl/孔,置37℃水浴孵育1小時(shí)。
            (2)棄去血清,用PBS-T漂洗5遍,甩干。
            (3)將凍干辣根過(guò)氧化物酶-病毒抗原標(biāo)記物1:10稀釋后,加入反應(yīng)板相應(yīng)孔內(nèi),100μl/孔,37℃水浴孵育1小時(shí)。
            (4)棄去酶標(biāo)抗體,用洗滌液洗滌6次,甩干。
            (5)加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴,37℃,避光3~5分鐘。
            (6)加終止液(4NH2SO4)于每反應(yīng)孔,一滴/孔。
            結(jié)果判斷:
            (1)目測(cè)方法:
            陽(yáng)性對(duì)照孔呈明顯藍(lán)色,陰性對(duì)照孔呈無(wú)色,對(duì)照成立;若待檢血清孔呈明顯淡藍(lán)色或深藍(lán)色(TMB),則標(biāo)本為出血熱IgM抗體陽(yáng)性,反之陰性。
            (2)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè):
            于450nm(TMB)陽(yáng)性對(duì)照孔OD值/陰性對(duì)照孔OD值,即P/N≥2.1,對(duì)照成立;若待檢血清孔OD值與陰性對(duì)照孔OD比值≥2.1,則標(biāo)本為流行性出血熱IgM抗體陽(yáng)性,反之陰性。
            (陰性對(duì)照孔OD值小于0.05按0.05記,若大于0.05按實(shí)際數(shù)值計(jì)算)
            意義:

            陽(yáng)性結(jié)果,表明患者新近漢坦病毒感染,用于出血熱早期診斷。

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