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            技術(shù)講解:細(xì)胞融合的方法及誘導(dǎo)物

            來源:上海士鋒生物科技有限公司   2013年04月11日 08:08  

            同種細(xì)胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細(xì)胞自發(fā)合并,稱自發(fā)融合;異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合,稱誘發(fā)融合。

            仙臺病毒法融合

            ①兩種細(xì)胞在一起培養(yǎng),加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細(xì)胞

            膜上。并使兩細(xì)胞相互凝聚;

            ②在37℃中,病毒與細(xì)胞膜發(fā)生反應(yīng),細(xì)胞膜受到破環(huán),此時需

            要Ca2+和Mg2+,zui適PH為8.0一8.2;

            ②細(xì)胞膜連接部穿通,周邊連接部修復(fù),此時需Ca2+和ATP;

            ④融合成巨大細(xì)胞,仍需ATP 。

            聚乙二醇(PEG)法

            聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)為:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作細(xì)胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后,與溫?zé)岬腅ngle氏液混合。通常用分子量低于1000的PEG作融合劑,50%PEG溶液能產(chǎn)生zui多雜交細(xì)胞。PEG溶液在pH6.0時細(xì)胞融合率zui高。

            電融合法

            在直流電脈沖的誘導(dǎo)下,細(xì)胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變,使異種細(xì)胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂,進(jìn)而質(zhì)膜開始連接,直到閉和成完整的膜,形成融合體。

            優(yōu)點(diǎn):融合率高、重復(fù)性強(qiáng)、對細(xì)胞傷害小;

            裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;

            免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程、誘導(dǎo)過程可控性強(qiáng)。

            融合誘導(dǎo)物

            細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒(Sendai virus),化學(xué)法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇,因?yàn)樗椎?、簡便,且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機(jī)制尚不*清楚,它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。動植物細(xì)胞融合方法不同,生物法利用滅活仙臺病毒是動物細(xì)胞融合所*的。

            自發(fā)條件下或人工誘導(dǎo)下, 兩個不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜種細(xì)胞。基本過程包括細(xì)胞融合導(dǎo)致異核體(heterokaryon)的形成, 異核體通過細(xì)胞有絲分裂導(dǎo)致核的融合, 形成單核的雜種細(xì)胞。有性生殖時發(fā)生正常的細(xì)胞融合, 即由兩個配子融合成一個合子。

            細(xì)胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究,而且還有重要的應(yīng)用價值,在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍(lán)、粉藍(lán)煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細(xì)胞融合另一個重要應(yīng)用就是制備單克隆抗體,單克隆抗體可以用作診斷試劑,治療疾病和運(yùn)載藥物,具有準(zhǔn)確,,簡易,快速等優(yōu)點(diǎn)。

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