血球計(jì)數(shù)板被用以對(duì)人體內(nèi)紅、白血球進(jìn)行顯微計(jì)數(shù)之用,也常用于計(jì)算一些細(xì)菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量,是一種常見(jiàn)的生物學(xué)工具。
如何使用血球計(jì)數(shù)板。以下做了7點(diǎn)說(shuō)明:
1.視待測(cè)菌懸液濃度,加無(wú)菌水適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄐ泵嬉话阆♂?00倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過(guò)多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
4.靜置片刻,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。
5.計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)中方格組成,按對(duì)角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個(gè)中方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),除數(shù)上述四個(gè)大方格外,還需數(shù)中央1個(gè)大方格的菌數(shù)(即80個(gè)小格)。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,在計(jì)數(shù)時(shí),對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中。見(jiàn)右圖:即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個(gè).
6.對(duì)于出芽的酵母菌,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。
7.測(cè)數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,放入盒內(nèi)保存。
如何使用血球計(jì)數(shù)板。以下做了7點(diǎn)說(shuō)明:
1.視待測(cè)菌懸液濃度,加無(wú)菌水適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄐ泵嬉话阆♂?00倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過(guò)多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
4.靜置片刻,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。
5.計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)中方格組成,按對(duì)角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個(gè)中方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),除數(shù)上述四個(gè)大方格外,還需數(shù)中央1個(gè)大方格的菌數(shù)(即80個(gè)小格)。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,在計(jì)數(shù)時(shí),對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中。見(jiàn)右圖:即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個(gè).
6.對(duì)于出芽的酵母菌,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。
7.測(cè)數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,放入盒內(nèi)保存。
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