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            培養(yǎng)板的清洗和消毒

            來源:上海乾思生物科技有限公司   2014年04月29日 13:32  
                  培養(yǎng)板一般為一次性使用,尤其在接觸了有毒、有害等物質(zhì)后更應(yīng)該處理后丟棄。但如果要反復(fù)使用則一定要進(jìn)行正確的清洗和消毒,以保證細(xì)胞培養(yǎng)的效果。
            問:只有紫外照射可以保證無菌嗎?可不可以從清洗方面做點(diǎn)工作? 
            答:看你什么用途了,一般貼壁生長的細(xì)胞用重復(fù)利用的培養(yǎng)板效果不是很好,因?yàn)榕囵B(yǎng)板表層在生產(chǎn)時(shí)涂有一層促進(jìn)細(xì)胞貼壁的物質(zhì),在清洗后多半會(huì)失去。懸浮或是半懸浮生長的細(xì)胞還可以。
            我們一般是先泡酸過夜,清洗干凈,三蒸水清洗,再用*浸泡清洗,再在工作臺里用無菌水過一遍,在蓋上蓋子在烘箱里烤干,待烤干后,打開在超凈工作臺里近紫外(距離紫外燈<20cm)照射半個(gè)小時(shí)以上,效果很好,沒有污染過。
            其實(shí)不管老板有錢沒錢,我們做實(shí)驗(yàn)室尤其是預(yù)實(shí)驗(yàn)或是摸條件時(shí),我們一般都能省就省了,留點(diǎn)錢還不如買點(diǎn)好試劑呢:)
            我們一般是先清洗干凈,泡酸過夜,三蒸水清洗,在蓋上蓋子在烘箱里烤干,待烤干后,有兩種選擇:1、在超凈臺里近紫外燈(距離紫外燈<30cm)照射半個(gè)小時(shí)以上,六孔板一般半個(gè)小時(shí),24孔板一個(gè)小時(shí),96孔板時(shí)間更長,效果很好,沒有污染過;2、到放射科照Co60,照完了盡快用。
            我們這里腫瘤細(xì)胞耐性很好,所以重復(fù)利用沒什么問題,如果原代培養(yǎng)比較嬌貴的細(xì)胞用新板子,也不是很貴。
            我們的經(jīng)驗(yàn)是:清洗后用消毒液浸泡,泡酸過夜,自來水反復(fù)沖洗,雙蒸水沖洗三遍,無塵環(huán)境晾干,用之前紫外燈照射半小時(shí)以上,效果很好。我們現(xiàn)在的窮同仁一直在應(yīng)用。 
            *了也會(huì)變黃,因此如果做mtt或比色時(shí)是不能用的,在不熟悉細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候可以先學(xué)學(xué)細(xì)胞記數(shù),熟練了用新的,不過腫瘤細(xì)胞可以在舊板子上長得很好喲,原代的細(xì)胞比較難養(yǎng),塑料的較好。
            紫外的穿透能力很弱,板子紫外照射時(shí)是否將蓋子翻過來一起照射那?還有,細(xì)胞瓶紫外效果如何?
            板子泡酸后和瓶子一樣的清洗方法清洗后,60度烤干,然后放在工作臺里(打開蓋子)用紫外線照射半小時(shí)以上,一小時(shí)或兩小時(shí),蓋子同時(shí)反過來照。瓶子照射沒有效果,要用其他方法 
            同意樓上大家的意見。96孔和24孔板子在做完了后要先泡清洗計(jì),在用棉花搽洗每個(gè)孔,這樣有些貼壁細(xì)胞才不會(huì)有細(xì)胞碎片的殘留,在做mtt是很重要,要不很不準(zhǔn)的。后面就是沖洗,泡酸,3蒸水洗,紫外照射30-60分鐘,不要時(shí)間太長,這樣板子容易變色!但是如果是做MTT還是建議用新板子!舊板子做,結(jié)果不準(zhǔn)!
            泡酸時(shí)不要用剛配好的濃酸,因?yàn)槟菢訒?huì)把培養(yǎng)板表面促進(jìn)細(xì)胞貼附的一層膜腐蝕掉,細(xì)胞就無法貼壁了。用酸泡完后用自來水清洗,再用蒸餾水清洗3-5次,然后泡在75%的酒精里(酒精用純的無水乙醇),用前在紫外線下照射1h?;究杀WC95%以上無菌,用這些板做做預(yù)實(shí)驗(yàn)是沒問題的。
            1.鈷60照射適合大量的板同時(shí)滅菌,攢一箱,再送去滅菌。
            2.紫外消毒適合少量的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板,比如培養(yǎng)板,將蓋打開,翻過來,連同板一起在紫外下照射2小時(shí)即可,事先不用酒精泡。

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