免疫組織化學(xué)組織細(xì)胞的組織切片
 

一、載玻片的處理

    免疫組化染色時(shí)間長，特別是雙PAP、免疫金銀染色等方法，所需時(shí)間更長，并要反復(fù)洗滌，切片在試劑中長時(shí)間浸泡，經(jīng)多次洗滌，極易造成脫片而影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。需采用以下方法處理：載玻片先置于洗潔液(或洗衣粉溶液)中煮沸30min，清水洗干凈后放人清潔液中浸泡12—24h，漂洗，用蒸餾水清洗后置于烤箱內(nèi)干燥，然后涂以切片黏合劑。

    切片黏合劑的配制方法如下。

    (1)明礬—明膠的配制方法  明礬、明膠各1g，加入到100ml 1％甘油中，加熱至70~C熔化，并攪拌混合至*透明狀，將切片浸入此液中幾分鐘，也可以涂在載玻片上，36℃2h后即可使用。

    (2)合成乳膠—聚醋酸乙烯乳液的配制方法  合成乳膠是一種高分子乳化聚合物，具有高度黏合力，無毒、無臭、無腐蝕性。取合成乳膠10份，加蒸餾水90份，攪拌成10％的使用液備用。載玻片可以浸泡此液中，也可以涂片。浸泡時(shí)濃度稀一點(diǎn)；用于涂片濃度高一點(diǎn)，涂完后在36~C中5h后即可使用。

    (3)多聚賴氨酸  0．05％多聚賴氨酸(分子質(zhì)量200kDa)水溶液，臨用時(shí)現(xiàn)配，電吹風(fēng)吹干即可使用。

    (4)進(jìn)口切片黏合劑  此膠屬樹脂膠，國外作為木材的黏合劑。涂膠方法同(1)，即直接涂片或浸入涂片。一般買回來的黏合劑需10％稀釋。

    (5)甲醛—明膠  1％明膠5mi，2％甲醛5ml，混合即可涂片。

    (6)明膠—鉻明礬—戊二醛黏合劑  載玻片在10％Extron中65℃清洗60min，用熱水沖洗60min，雙重蒸餾水洗2次，空氣干燥，然后浸在0．5％明膠—0．05％鉻明礬液(注：先將0．5％明膠60~C溶解，冷卻后加入鉻明礬)中，40~C浸浴lmin，空氣干燥，用0。2％戊二醛(PBS配制)固定60min，PBS洗后，切片空氣干燥，于4~C保存。

    (7)白膠—多聚賴氨酸混合液—取進(jìn)口切片黏合劑10ml，加10mg多聚賴氨酸混勻，即可用于涂片。

    二、石蠟切片

    石蠟切片不僅是常規(guī)病理中的重要切片形式，也是免疫組化研究中較常用的切片形式，它能滿足免疫組化的連續(xù)切片要求。為了便于染色及觀察，切片時(shí)應(yīng)注意：①連續(xù)切片時(shí)應(yīng)按順序分離及貼片，不應(yīng)顛倒；②貼片時(shí)應(yīng)距載玻片一端至少1cm，一般靠一邊，以利于顯色安全；③用于免疫組織化學(xué)染色的蠟溫應(yīng)為56—58℃，切片水溫在40℃左右，應(yīng)先置于冷水中，然后再移人熱水中，這樣可以使切片能順利展平；④切片刀要求快，切片要薄，無刀痕和皺褶，在染色時(shí)可減少非特異染色；⑤烤片時(shí)要注意，抗原性較強(qiáng)的組織可在60℃烤3—8h，抗原較弱的組織可于37℃恒溫箱內(nèi)；⑥切片如需長期保存，可置于4℃或室溫下，千萬不可脫蠟后4℃保存，因脫蠟后失去了對(duì)抗原決定簇的保護(hù)。

    三、冰凍切片

    冰凍切片的優(yōu)點(diǎn)是能較完整地保存抗原性。組織細(xì)胞的某些抗原成分，特別是細(xì)胞膜抗原、受體抗原、酶及肽類抗原在石蠟切片的處理過程中，可不同程度遭受破壞或失去抗原性，而冰凍切片就能zui大限度地保護(hù)抗原。缺點(diǎn)是在冷凍過程中形態(tài)結(jié)構(gòu)可能破壞，抗原易彌散，不能用于常規(guī)病檢及回顧性研究。