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            ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制

            來源:上海雙贏生物科技有限公司   2015年03月23日 17:12  

            elisa實驗中的封閉液小知識

            ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:

            1、ELISA實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;

            2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

            3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。

            4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。

            封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結合上的明膠。

            封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結合抗體或抗原的時候就不會產生非特異結合了,不會影響實驗的準確度。

            tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結合或結合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-

            附件:ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置

            ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎,ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總如下:(1) ELISA實驗包被緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(3) ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。

            試劑

            (1) ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

            NaHCO3 1.59克

            NaHCO3  2.93克

            加蒸餾水至1000ml

            (2) ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M

            KH2PO4       0.2克

            Na2HPO4·12H2O  2.9克

            NaCl        8.0克

            KCl         0.2克

            Tween-20 0.05%  0.5ml

            加蒸餾水至1000ml

            (3) ELISA實驗稀釋液:

            牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

            加洗滌緩沖液至100ml

            或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。

            (4) ELISA實驗終止液(2M H2SO4):

            蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

            (5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

            0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml

            0.1M 檸檬酸(19.2克/L)      24.3ml

            加蒸餾水50ml。

            (6) ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:

            TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml

            底物緩沖液(PH5.5)    10ml

            0.75%H2O2 32μl

            (7) ELISA實驗ABTS使用液:

            ABTS        0.5mg

            底物緩沖液(PH5.5)  1ml

            3%H2O2 2μl

            (8)ELISA實驗封閉液:

            牛血清白蛋白(BSA) 5克

            加洗滌緩沖液至100ml。

            值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。

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            為了保證ELISA實驗的準確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔,嚴防交叉污染。

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