異常

結(jié)果描述

原因分析

對策

白板

顯色步驟結(jié)束后，酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。

試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用

檢查試劑的組分及批號，確認未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。

錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B

嚴格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。

洗板及加樣過程中，酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力

確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈。

終止液誤作洗滌液稀釋或當?shù)孜锞彌_液配制

每次配制時都應(yīng)看清標簽標明物質(zhì)。

蒸餾水有問題

確認配制洗液的純化水達到要求且未污染，與好蒸餾水比較。

顯色弱、靈敏度低

實驗結(jié)束后，包括陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。

試劑盒超過期， 超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號； 試劑盒沒有按規(guī)定進行保存，受高溫影響；

實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期。 不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規(guī)定儲藏。

試劑、樣品用前未平衡至室溫

從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡 20分鐘左右。

加入試劑的體積和時間有誤， 移液器計量不準，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔；

確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當。 校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應(yīng)*。

洗板及加樣過程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力；

確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。

孵育時間及孵育溫度未達到要求 ，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整。

孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。 保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。

洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長；

嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)。

顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入；

顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入。

底物作用時間不夠；

準確定時。

蒸餾水水質(zhì)有問題；

測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。

實驗結(jié)束后，陰陽性對照正常，質(zhì)控正常，但臨床標本感覺顯色較弱

待測標本中可能不含強陽性標本，故結(jié)果可能是正常的

如有懷疑，可復(fù)檢

標本加入疊氮鈉作為防腐劑

酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑

陰陽性對照正常，但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。

未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標本，但 質(zhì)控或弱陽性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出。

確認孵育的溫度及孵育時間達到要求。

質(zhì)控品或標本高溫放置過久，或被反復(fù)凍融致待測物滴度下降，而未能檢出

質(zhì)控品或標本避免反復(fù)凍融。標本在一周內(nèi)使用的，可存于 2-8℃，如需長期保存，應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝，并置于-20℃以下保存。

儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配。

重新設(shè)定酶標儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配。

終止后，目測結(jié)果正常，但酶標儀讀值結(jié)果偏低

酶標儀參數(shù)設(shè)定不正確。

重新設(shè)定酶標儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配。

靈敏度過高、板底高、高背景

終止后，整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色；或陰陽性對照、質(zhì)控正常，標本陰性標本 OD值過高。

整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯加其他試劑造成，如同時操作兩對半試劑時，測 HbsAb板用于測HBsAg等；

實驗前檢查試劑的組分及批號，確認所有組分均屬于對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。

酶標對吸頭的污染以及對盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現(xiàn)象；

避免試劑組分間的交叉污染，確保吸頭、容器的干凈。

顯色劑在光照條件下放置過久，實驗前已變藍

顯色劑 A、B未使用前避光保存

孵育溫度過高或孵育時間過長；

孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。

未按要求洗板。特別是洗滌時每孔未注滿洗液，易造成花板黃板現(xiàn)象

嚴格按說明書要求洗板。

花板，一般是由于臨床標本的收集、處理和保存方法不當造成

放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉(zhuǎn)速（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意。

出現(xiàn)隨機性的花板、跳孔現(xiàn)象

樣品離心不*，反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血或殘留細胞成分；

充分離心， 3000rpm6分鐘以上。

加樣時交叉污染；

加標本時盡量 避免交叉污染。如盛標本的試管周圍常有血痂，易脫落，應(yīng)遠離酶標板。

手工洗板造成的交叉污染

手工洗板時前 3次注洗液后應(yīng)立即棄去，后幾次再設(shè)定浸泡時間，可減少交叉污染

洗板機加液頭堵塞導致加液不滿或吸液殘留量較大，造成 花板、跳孔

疏通加液頭，使洗板時每孔均注滿洗液，吸液時殘留量要小。

拍板時交叉污染

洗板完畢拍板時用合適的吸水紙巾，不要把無關(guān)物質(zhì)拍進板孔，并盡量不要在同位置拍，以免交叉污染。

假陽性

假陽性現(xiàn)象是一個綜合現(xiàn)象，可參考上文 “靈敏度過高、板底高、高背景” 中的分析。這里只列舉常見的原因及對策。

計算 Cutoff值時使用的公式不正確，導致計算得出的CutOff值過低，從而導致出現(xiàn)假陽性

CutOff值計算公式應(yīng)嚴格參照所屬產(chǎn)品的說明書，應(yīng)注意各個酶免產(chǎn)品的Cutoff值計算公式不盡相同。

洗板時未能注滿洗液或洗板次數(shù)、浸泡時間不夠， 洗滌不充分，樣品中有其他成分殘留 導致花板、跳孔，假陽性增多

嚴格按說明書要求洗板。調(diào)整洗板機時，應(yīng)注意有時儀器標示的液量與實際液量并不相符，應(yīng)根據(jù)實際情況調(diào)整至每孔注滿。

血清標本處理不當，如未除去細胞成分、纖維蛋白原及其它干擾物可出現(xiàn)孔底由變藍的跳孔現(xiàn)象，此標本重復(fù)實驗結(jié)果往往是陰性；

放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉(zhuǎn)速（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意。

廠家試劑質(zhì)量的變化造成；

國家標準要求提高靈敏度時，廠家試劑靈敏度也相應(yīng)提高，假陽率常常有所上升，但只要在合理范圍，是可以接受的。

水質(zhì)問題；

防止蒸餾水污染。

加酶量過多（如 50uL誤認為100uL）或丙肝酶稀釋時加量過多；

加酶前檢查移液器調(diào)節(jié)量是否準確，稀釋酶時思想要集中。

培養(yǎng)箱溫度超過 37℃或酶結(jié)合物反應(yīng)時間或底物顯色時間超過；

放入板以前要檢查培養(yǎng)箱的溫度，準確定時。

底物配制時間過長、或底物污染；

底物應(yīng)在酶反應(yīng)完畢即將洗滌前 5分鐘配制，注意避光。

該批樣品放置時間過長，樣品污染；

樣品應(yīng)保持新鮮，或低溫保存，防止污染。

移液嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*而用于加酶或底物；

移液嘴盡可能一次性使用。

重復(fù)性差

1、樣品數(shù)量不一，加樣時間長短不一；

重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近。

2、樣品加入后未混勻；

加樣后在混勻器上充分混勻。

3、酶標儀濾光片不對或輸入波長不對；

TMB顯色用450/630波長.

4、酶標儀測定重復(fù)性差；

校對酶標儀。

5、洗滌不正確；

洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時反應(yīng)板面向下，垂直用力甩凈內(nèi)容物（可多甩幾次），在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應(yīng)有堵孔，洗滌應(yīng)充分。

6、溫育條件不一致（一次用水育，一次用恒溫箱）

恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃。

7、不慎多加或少加酶或顯色劑；

多加時顯色深，少加則淺，用記號筆圈上，便于分析。

8、閾值附近時陰時陽；

同一樣品做三個復(fù)孔，以二個（含二個以上相同結(jié)果為準）

9、加樣量不足、保溫時間、洗滌條件一致；

盡可能使用同一移液器和裝緊吸嘴重復(fù)測定標本。條件、人員等應(yīng)盡量與上次保持一致。