兔前列腺素F2a (PGF2a)elisa試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標

準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從*孔、第二

孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔， 再在第三、 第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。 （稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 180ng/L，120ng/L ，60ng/L，30ng/L， 15ng/L） 。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。 在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣

品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。