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            兔前列腺素F2a (PGF2a)elisa試劑盒操作步驟

            來源:上海雙贏生物科技有限公司   2015年03月27日 22:16  

            兔前列腺素F2a (PGF2a)elisa試劑盒操作步驟

            1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標

            準品 100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后從*孔、第二

            孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔, 再在第三、 第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準

            品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。 (稀釋后各孔加樣量都為 50μl,濃度分別為 180ng/L,120ng/L ,60ng/L,30ng/L, 15ng/L) 。

            2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣

            品孔。 在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl, 然后再加待測樣品 10μl(樣

            品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

            4. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

            重復 5 次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同 3。

            8. 洗滌:操作同 5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。

            11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

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