小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)-結(jié)果判定:定量測(cè)定
ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致,因此在定量測(cè)定中,每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙,以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是的檢測(cè)區(qū)域。甲胎蛋白質(zhì)ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示。測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法,其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線示。
小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之顯色
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時(shí)間仍是影響顯色的因素。在一定時(shí)間內(nèi),陰性孔可保持無(wú)色,而陽(yáng)性孔則隨時(shí)間的延長(zhǎng)而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中,加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行,時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制,有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯色情況適當(dāng)縮短或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,及時(shí)判斷。
OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,再延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,顯色反應(yīng)結(jié)束時(shí)加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺(tái)上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時(shí)間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達(dá),隨即逐漸減弱,至2小時(shí)后即可*消退至無(wú)色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)間(12-24小時(shí))不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時(shí)可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。
小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)之比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn),需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。比色時(shí)應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),測(cè)讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過(guò)程的孔),以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn),以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進(jìn)行計(jì)算。
比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長(zhǎng)寫(xiě)于A字母的右下角,如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。
小鼠α1-微球蛋白(α1M)ELISA試劑盒相關(guān)產(chǎn)品如下:xyF754Hu 人過(guò)氧化還原酶4(PRDX4)檢測(cè)試劑盒
xyF756Hu 人過(guò)氧化還原酶6(PRDX6)檢測(cè)試劑盒
xyF819Hu 人張力蛋白3(TNS3)檢測(cè)試劑盒
xyF863Hu 人胞裂蛋白3(SEPT3)檢測(cè)試劑盒
xyF952Hu 人Nesprin 2蛋白(Nesp2)檢測(cè)試劑盒
xyF953Hu 人Nesprin 1蛋白(Nesp1)檢測(cè)試劑盒
xyF994Hu 人網(wǎng)狀蛋白4(RTN4)檢測(cè)試劑盒
xyG011Hu 人甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)檢測(cè)試劑盒
xyG191Hu 人N-乙酰轉(zhuǎn)移酶1(NAT1)檢測(cè)試劑盒
xyG239Hu 人外生骨疣蛋白1(EXT1)檢測(cè)試劑盒
xyG300Hu 人小腦肽1(CBLN1)檢測(cè)試劑盒
xyG342Hu 人色胺酸羥化酶1(TPH1)檢測(cè)試劑盒
xyG343Hu 人色胺酸羥化酶2(TPH2)檢測(cè)試劑盒
xyG356Hu 人3-羥基丁酸脫氫酶1(BDH1)檢測(cè)試劑盒
xyG439Hu 人小白蛋白(PVALB)檢測(cè)試劑盒
xyG465Hu 人腺苷高半胱氨酸水解酶(AHCY)檢測(cè)試劑盒
xyG476Hu 人組氨酸脫羧酶(HDC)檢測(cè)試劑盒
xyG529Hu 人溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移酶1(LPCAT1)檢測(cè)試劑盒
xyG530Hu 人溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶2(LPCAT2)檢測(cè)試劑盒
xyG531Hu 人溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移酶3(LPCAT3)檢測(cè)試劑盒
xyG610Hu 人芳基硫酸酯酶B(ARSB)檢測(cè)試劑盒
xyG820Hu 人甘胺酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶(GNMT)檢測(cè)試劑盒
xyG919Hu 人尿苷二磷酸糖基轉(zhuǎn)移酶8(UGT8)檢測(cè)試劑盒
xyG948Hu 人泛醌蛋白2(UBQLN2)檢測(cè)試劑盒
xyG963Hu 人胸苷酸合成酶(TYMS)檢測(cè)試劑盒
xyH015Hu 人踝蛋白2(TLN2)檢測(cè)試劑盒
xyH033Hu 人轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶6(TGM6)檢測(cè)試劑盒
xyH088Hu 人突觸極蛋白2(SYNPO2)檢測(cè)試劑盒
xyH097Hu 人亞硫酸鹽氧化酶(SUOX)檢測(cè)試劑盒
xyH108Hu 人硫酸酯酶1(SULF1)檢測(cè)試劑盒
xyH135Hu 人角鯊烯單加氧酶(SQLE)檢測(cè)試劑盒
相關(guān)產(chǎn)品
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