人中期因子(MK)免疫組化試劑盒
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人中期因子(MK)免疫組化試劑盒
【實驗原理】該試劑盒以HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,
HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合,zui后加入HRP-SA,形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA 復(fù)合物,顯微鏡下觀察成像。
【試劑盒所含試劑】
試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100 10ml(選用)
試劑B 封閉緩沖液(封閉用) 20 mL
試劑C (*分裝)已稀釋的即用型一抗(2.5ml)
試劑D (*分裝)生物素化羊抗兔IgG 1 支
(濃度1.5 mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液20ml
試劑E HRP-SA 復(fù)合物1 支(濃度1 μM,稀釋比1:50~1:200)100 μL
試劑F DAB 顯色液 5ml
人中期因子(MK)免疫組化試劑盒
【注意事項】
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。
3. 若試劑為微量濃縮液,用前應(yīng)低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用TBS 充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween 20,否則會影響結(jié)果觀察。
5. 如須復(fù)染細胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。
【抗原修復(fù)方法】
常用抗原修復(fù)液:檸檬酸緩沖液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修復(fù)液(pH8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修復(fù)法
切片脫蠟水化處理,TBS 沖洗,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育
20~30min 后TBS 沖洗即可。
二、微波抗原修復(fù)法
微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波10~15min,取出微波
盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,
須自行調(diào)整。
三、直接高壓抗原修復(fù)法
取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復(fù)
液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時1.5~2.5min 即可脫離熱源,自
然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。
四、隔水式高壓抗原修復(fù)法
不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸
騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時
4~8 min 即可關(guān)閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用
于較難檢測或核抗原的修復(fù)。
【保存】:2-8℃
【保質(zhì)期】:6個月
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