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            綿羊降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)elisa試劑盒操作步驟

            來源:上海雙贏生物科技有限公司   2015年04月09日 14:35  

            綿羊降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)elisa試劑盒操作步驟:

            1.標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

            48 ng/L 5 號標(biāo)準品 150μl 的原倍標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

            24 ng/L 4 號標(biāo)準品 150μl 的 5 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

            12 ng/L 3 號標(biāo)準品 150μl 的 4 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

            6 ng/L 2 號標(biāo)準品 150μl 的 3 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

            3 ng/L 1 號標(biāo)準品 150μl 的 2 號標(biāo)準品加入 150μl 標(biāo)準品稀釋液

            2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、

            待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

            3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

            4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

            5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

            重復(fù) 5 次,拍干。

            6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。

            7. 溫育:操作同 3。

            8. 洗滌:操作同 5。

            9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

            15 分鐘.

            10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。

            11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

            綿羊降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)elisa試劑盒原理:

            本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中綿羊降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)水平。用純化的綿羊降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP),再與 HRP 標(biāo)記的降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準曲線計算樣品中綿羊降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)濃度。

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