關鍵詞:內(nèi)皮細胞培養(yǎng)服務|實驗技術服務
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內(nèi)皮細胞培養(yǎng)服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結(jié)果。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>1.干粉培養(yǎng)基原倍液的配制
1）配制過濾除菌的細胞培養(yǎng)基
①閱讀培養(yǎng)基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。
②根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下整理并入容器。加注射用水至總體積的95%，輕微攪拌溶解。
③加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì)。
④輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。
⑤用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
⑥用0.22μm濾膜正壓過濾除菌。
⑦溶液應在2℃～8℃下避光保存。
2.配制可高壓滅菌細胞培養(yǎng)基
①根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95%，輕微攪拌溶解。
②在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
③待溶液冷卻至室溫，加入無菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液規(guī)定體積、無菌7.5%（w/v）碳酸氫鈉溶液規(guī)定體積，加注射用水（20℃～30℃）至規(guī)定體積，混勻。
④如果必要，用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
⑤溶液應在2℃～8℃下避光保存。
內(nèi)皮細胞易于從大血管分離培養(yǎng)成單層細胞，對于研究內(nèi)皮細胞再生、腫瘤促血管生長因子（TAF）等有很大價值。
研究人內(nèi)皮細胞培養(yǎng)以人臍帶靜脈灌流消化法zui為簡便，其法如下：
1、產(chǎn)后新鮮臍帶，無菌剪取10—15厘米長一段，如不能立即培養(yǎng)，可于12小時內(nèi)保存于4℃。
2、用三通注射器吸取溫PBS液注入臍靜脈中洗去殘血，在入口處用線繩扎緊，以防液體返流。
3、用血管鉗夾緊臍帶一端，從另一端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為0.1%的粗制膠原酶，充滿血管，消化3—10分鐘；注入口用線繩扎，以防液體返流。
4、吸出含有內(nèi)皮細胞的消化液，于離心管中，注入溫PBS輕輕反復沖洗后，一并注入離心管中（此步驟可重復）。5、離心去上清，加入RPMI1640培養(yǎng)液制成細胞懸液，接種入培養(yǎng)器皿中，置溫箱培養(yǎng)。兩至三天可見細胞長成單層。