關(guān)鍵詞:神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*。
神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
實(shí)驗(yàn)方法原理     SD胎鼠腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)7 d，微量移液器塑料滴頭于培養(yǎng)孔內(nèi)機(jī)械性劃割培養(yǎng)之神經(jīng)元，依劃割程度不同分為輕、中、重3組，對(duì)照組除不進(jìn)行機(jī)械性劃割，其余處理同損傷組，傷后不同時(shí)間點(diǎn)（10，30min ， 1，3，6，12，24 h）檢測(cè)細(xì)胞存活率及培養(yǎng)液上清乳酸脫氫酶(LDH)含量。
實(shí)驗(yàn)材料    SD大鼠
試劑、試劑盒    硼酸硼砂緩沖液胰酶-EDTA 消化液D-Hanks’
儀器、耗材    眼科剪滴管離心機(jī)培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱
實(shí)驗(yàn)步驟    
1. 孕16 d SD 大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的 D-Hanks’平衡鹽液中。
2. 在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱內(nèi)消化20 min，中間搖晃一次。
3. 隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液(DMEM＋10%FBS)的離心管內(nèi)終止消化液作用5 min。
4. 用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的 DMEM＋10%FBS 的離心管內(nèi)，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次，靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟 2～3 次。
5. 將所收集的上清經(jīng)200 目篩網(wǎng)過濾。
6. 過濾后的細(xì)胞懸液于800 rpm 離心5 min，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液(DMEM＋20%FBS)并吹打 成單細(xì)胞懸液。
7. 細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度按1.5×105/cm2  種入6 孔板內(nèi)，放入CO2 孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48 h 后換液并 加入Ara-C使其終濃度為 1×10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量換液。以后每隔 3 天半量換液一次。