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            MP,人肺炎支原體(MP)ELISA試劑盒使用說明書

            來源:上海雙贏生物科技有限公司   2015年06月10日 14:08  

            人肺炎支原體(MP)ELISA試劑盒使用說明書

            本試劑盒僅供研究使用。

            實驗原理

            人肺炎支原體(MP)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人肺炎支原體(MP)表達。用純化的人肺炎支原體(MP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中肺炎支原體(MP)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除

            去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的肺炎支原體(MP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗

            原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人肺炎支原體(MP)的存在與否。

            人肺炎支原體(MP)ELISA試劑盒組成

            130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶

            2、酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶

            3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶

            4、樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

            5、顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張

            6、顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個

            標本要求

            1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

            2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

            人肺炎支原體(MP)ELISA試劑盒操作步驟

            1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

            2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

            3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

            4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

            5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

            6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

            7.溫育:操作同3。

            8.洗滌:操作同5。

            9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

            10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

            11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

            計算和結(jié)果判定:

            試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10

            臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

            陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為肺炎支原體(MP)陰性

            陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為肺炎支原體(MP)陽性。

            人肺炎支原體(MP)ELISA試劑盒注意事項

            1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

            2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

            3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

            4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

            5.底物請避光保存。

            6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

            7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須

            注意安全。

            保存條件及有效期

            1.試劑盒保存:2-8℃。

            2.有效期:6個月

            免責聲明

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