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            Western Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

            來源:上海拜力生物科技有限公司   2015年07月01日 18:43  

            關(guān)鍵詞:Western Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
            簡介:世界*品牌Western Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
            Western Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
            我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
            產(chǎn)品品牌:   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
            測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(western blot),它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡(western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡(western blot)常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
            1,蛋白質(zhì)抽提
            實驗對象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑),勻漿后抽提總蛋白(或核蛋白)。
            實驗對象為細胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細胞,PBS清洗細胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑)抽提總蛋白(或核蛋白)。
            2. 蛋白質(zhì)定量:按BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。 
            3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預(yù)染蛋白marker分別上樣,標準加進*個孔中,電泳分離蛋白。 
            4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白轉(zhuǎn)移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層,30mA恒流條件下,4°C轉(zhuǎn)移。 
            5. western blot膜的封閉和抗體孵育
            膜在5%脫脂奶粉溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結(jié)合。
            封閉過的膜加入一抗室溫孵育1.5小時,抗原抗體結(jié)合。
            加入HRP標記的二抗體以結(jié)合一抗,室溫孵育膜1小時。加入HRP標記的GAPDH抗體可同時檢測GAPDH含量。
            6. western blot結(jié)果檢測:化學(xué)發(fā)光法檢測,膜與化學(xué)發(fā)光底物孵育,經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件,并用GIS1000分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數(shù)字化。 
            7. western blot數(shù)據(jù)分析:目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參GAPDH/Actin的灰度值以校正誤差,所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對含量。
            8. 提供實驗報告,包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結(jié)果的相關(guān)數(shù)據(jù)。

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