常見(jiàn)問(wèn)題

解決對(duì)策及注意事項(xiàng)

兩快玻璃板之間灌膠,膠總是不平

玻璃沒(méi)有洗干凈，應(yīng)該要洗得非常干凈

過(guò)硫酸銨和TEMED的加量不合適，加量相對(duì)較多，凝膠凝固過(guò)快，也會(huì)造成膠不平現(xiàn)象

加完試劑以后沒(méi)有很好的搖勻，導(dǎo)致有些部位的聚合劑濃度過(guò)高，聚合相對(duì)較快造成膠不平

膠總是漏

避免玻璃邊緣（與膠條接觸處）破損

膠條一定要干，跑完電泳后，膠條就放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾著。下面的膠條注意不要老化，如果有裂紋的話(huà)用保鮮膜墊在上面，也可以有效防止漏膠

將兩塊玻板擺放*對(duì)齊，底部處于同一個(gè)平面

膜上有明顯氣泡

操作時(shí)將氣泡*排除

靠膜一側(cè)的濾紙應(yīng)鋪平

特異性低

優(yōu)化一抗

提高一抗和二抗的稀釋度

降低SDS-PAGE中蛋白的上樣量

背景高

優(yōu)化封閉液

優(yōu)化洗滌緩沖液，增加洗滌次數(shù)

減少曝光時(shí)間

較低的信號(hào)

優(yōu)化一抗

濃縮樣品

選擇更高敏感度的發(fā)光底物

條帶跑得比正常的窄

可能因?yàn)槟z凝的不均勻，聚合的不是很好，灌膠的時(shí)候盡量混勻

可能是樣品的問(wèn)題，如果鹽濃度較高，便會(huì)擠壓其它條帶，致使條帶寬窄不一，由于同樣的原因，樣品在凝膠中的速度會(huì)很慢，造成條帶走的較慢

可能是系統(tǒng)的ph出了問(wèn)題，有可能是電極緩沖液，也有可能是凝膠緩沖液，更新緩沖液。

條帶呈“微笑”和“倒微笑”效果

"微笑"是因?yàn)楣嗄z的時(shí)候冷卻不均勻，中間部分冷卻不好，導(dǎo)致凝膠中的分子有不同的遷移率所致。

“倒微笑“現(xiàn)象常常是由于垂直電泳時(shí)電泳槽的裝置不合適引起的，特別是當(dāng)凝膠和玻璃板組成的三明治底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不*便會(huì)產(chǎn)生這種現(xiàn)象

凝膠腫脹或卷曲

注意轉(zhuǎn)膜之前，切割下來(lái)的凝膠一定要在轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡平衡5-10分鐘，要含有20%的甲醇。