實驗試劑

1.   10％中性福爾馬林(pH6．8～7．1)甲醛 10ml 蒸餾水 90ml 醋酸鈉 2g

2.   酸性磷酸酶作用液

　 蒸餾水 90ml 0．2mol／L醋酸緩沖液(pH4．6) 12ml 5％* 2ml

3.   2％β—甘油磷酸鈉 4ml

　 先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后分成大致相等的兩份，一份中加*溶液，另一份加甘油磷酸鈉溶液，然后再將兩者緩緩混合，邊混邊攪勻后若酸堿度值不到pH5．0，可加少量醋酸的調(diào)整。此作用液在臨用前配制，不能貯存。配好后的作用液應(yīng)透明無絮狀懸浮物和沉淀，否則將嚴(yán)重影響實驗結(jié)果。

4.   1％硫化胺溶液

　　硫化胺 1ml 蒸餾水 9ml

5.   姬姆薩染液(1：30)

　　姬姆薩原液 3滴 磷酸鹽緩沖液(pH6．8) 5ml

6.   6％淀粉肉湯

　　牛肉膏 0．3g 蛋白胨 1.0g 氯化鈉 0．5g 蒸餾水 100ml

　　高壓滅菌9．9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水溫浴，促使溶解后置冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

實驗步驟

1.   取小白鼠一只，每日腹腔注射6％淀粉肉湯1ml，連續(xù)注射三天。

2.   在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生鹽水1ml，過3min后在原注射部位抽取腹腔液0．1～0．2ml。請注意!注射和抽液的進(jìn)針部位和深度要保持一致。否則可能抽不出腹腔液。

3.   將腹腔液滴在預(yù)冷的載玻片上，每片1～2滴，涂片，將玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱內(nèi)(4℃)，讓細(xì)胞自行鋪展。

4.   30min后，將玻片轉(zhuǎn)入10％中性福爾馬林，冰箱內(nèi)4℃固定30min。

5.   自來水漂洗5min，把水甩干。

6.   轉(zhuǎn)入酸性磷酸酶作用液中，37℃處理30min。

7.   自來水漂洗片刻。

8.   1％硫化胺處理3～5min。

9.   自來水沖洗，甩干。

10.用1∶30的姬姆薩染液染色15min。

11.自來水沖去染液，用磷酸鹽緩沖液臨時封片，鏡檢。

12.對照實驗：

將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min，使酶失活，再進(jìn)行6～11步的同樣實驗。