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2010
03-08

質(zhì)粒DNA分離和純化
質(zhì)粒DNA分離和純化：純化要求質(zhì)粒DNA中不應(yīng)存在對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的酶活性有抑制作用的有機(jī)溶劑分子或過(guò)高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、脂類(lèi)、基因組和RNA的污染。不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)于質(zhì)粒純度的要求不同，常規(guī)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（如酶切、測(cè)序等）普通純度的質(zhì)粒即可滿足實(shí)驗(yàn)，而對(duì)于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，要求質(zhì)粒的純度較高（如高純度或無(wú)內(nèi)毒素）。可以選擇不同的質(zhì)粒提取試劑盒以滿足不同的實(shí)驗(yàn)要求。純化方法用硅基質(zhì)材料吸附質(zhì)粒DNA來(lái)代替乙醇沉淀的純化方式，提取的質(zhì)粒純度高、操作方便快捷，可選擇的試劑盒有兩
2010
02-27

Lowry法蛋白濃度測(cè)定
Lowry法蛋白濃度測(cè)定目錄號(hào)規(guī)格價(jià)格PC0030-10001000T280.00產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Lowry法包括兩步反應(yīng)：*步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物；第二步是此絡(luò)合物將Folin試劑還原，產(chǎn)生深藍(lán)色，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質(zhì)。Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有酚類(lèi)、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外，不同蛋白質(zhì)因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強(qiáng)度稍有不同。Lowry法測(cè)定較為不受脂類(lèi)物質(zhì)干擾，適
2010
02-27

BCA蛋白濃度測(cè)定
BCA蛋白濃度測(cè)定目錄號(hào)規(guī)格價(jià)格PC0020-500500T280.00產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Bicinchoninicacid（BCA）法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗(yàn)方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu+。兩分子BCA與一個(gè)Cu+螯合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。與Lowery法相比，BCA蛋白測(cè)定方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，試劑及其形成的顏色復(fù)合物穩(wěn)定性俱
2010
02-27

Bradford蛋白濃度測(cè)定
Bradford蛋白濃度測(cè)定目錄號(hào)規(guī)格價(jià)格PC0010-25002500T150.00產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Bradford法是常用的蛋白質(zhì)快速定量方法。CoomassiebrilliantblueG-250與蛋白質(zhì)結(jié)合使染料的大吸收峰由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樘m色，595nm波長(zhǎng)下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相當(dāng)。反應(yīng)迅速，2分鐘即可達(dá)到平衡并在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。操作簡(jiǎn)便，只需要一種反應(yīng)試劑。干擾物質(zhì)少，鈉鉀鎂離子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巰
2010
02-27

蛋白電泳（PAGE）
蛋白電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺（簡(jiǎn)稱(chēng)TEMED）和催化劑過(guò)硫酸銨（簡(jiǎn)稱(chēng)AP）或核黃素（即vitaminB2）的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱(chēng)為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，簡(jiǎn)稱(chēng)PAGE）SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇（或者DTT）的樣品處理液，SDS可以斷開(kāi)分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的
2010
02-04

基因組DNA提取的原則
基因組DNA提取的原則1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性（因?yàn)檫z傳信息全部?jī)?chǔ)存在核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)中，故完整的一級(jí)結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ)）。2、排除其它分子（如蛋白質(zhì)、多糖、脂類(lèi)、有機(jī)溶劑等）的污染，使下游試驗(yàn)順利進(jìn)行。
2010
02-02

胍鹽/β-巰基乙醇法
胍鹽/β-巰基乙醇法適用于各種不同動(dòng)物材料和次生代謝物少的植物材料。在這種方法中，胍鹽使細(xì)胞充分裂解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實(shí)驗(yàn)全程中可以抑制RNase的活性，保護(hù)RNA不被降解。
2010
02-02

異硫氰酸胍/苯酚法
異硫氰酸胍/苯酚法異硫氰酸胍/苯酚法是一種傳統(tǒng)的RNA提取方法，適用于大部分動(dòng)植物材料，但對(duì)于次生代謝產(chǎn)物較多的植物材料提取RNA效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白復(fù)合體解離，并將RNA釋放到溶液中，采用酸性酚/氯仿混合液抽提，低pH值的酚將使RNA進(jìn)入水相，而蛋白質(zhì)和DNA仍留在有機(jī)相，從而可以完成RNA的提取工作。Solarbio公司的Trizol和總RNA提取試劑盒就是基于異硫氰酸胍/苯酚法開(kāi)發(fā)的一種總RNA提取試劑和試劑盒。Trizol法應(yīng)用非常廣泛，適用于包括動(dòng)物組織、微生物材料、培養(yǎng)細(xì)胞
2010
02-02

DNA的儲(chǔ)存
DNA的儲(chǔ)存儲(chǔ)存溶液：DNA為兩性解離分子，在堿性條件下較穩(wěn)定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分為：10mMTris-HCl（Tris與鹽酸形成強(qiáng)的緩沖對(duì)）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二價(jià)金屬陽(yáng)離子，抑制DNase的活性）；pH8.0（堿性條件可減少DNA的脫氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值為7.0，可作為DNA的儲(chǔ)存液，但有些實(shí)驗(yàn)室制備的ddH2O呈酸性（pH值小于7.0），這不僅影響DNA的洗脫效率，而且導(dǎo)致長(zhǎng)時(shí)間保存的DNA容易發(fā)生降解。因此建議用TE作為D
2010
01-26

RNA純化及獲得
RNA純化及獲得純化要求RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類(lèi)分子的污染。排除DNA分子的污染。純化方法及沉淀1、有機(jī)溶劑抽提法氯仿抽提：在使用RNA提取試劑進(jìn)行RNA提取時(shí)，常使用氯仿進(jìn)行抽提，以去除蔗糖、蛋白等雜質(zhì)，并促進(jìn)水相與有機(jī)相的分離，從而達(dá)到純化RNA的目的。沉淀：氯仿抽提RNA后，一般采用異丙醇或乙醇來(lái)沉淀水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇，室溫沉淀20-30分鐘，高速離心，
2010
01-26

RNA評(píng)價(jià)與鑒定
RNA評(píng)價(jià)與鑒定提取得到RNA溶液后，我們需要對(duì)RNA進(jìn)行相關(guān)的質(zhì)量檢測(cè)，以確定它是否符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。RNA用于不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)其質(zhì)量要求不盡相同。cDNA文庫(kù)構(gòu)建要求RNA完整且無(wú)酶等抑制物殘留；Northernblot實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA完整性要求較高，對(duì)酶反應(yīng)抑制物殘留要求較低；RT-PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA完整性要求不太高，但對(duì)酶反應(yīng)抑制物殘留要求嚴(yán)格。因此在進(jìn)行不同的實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)選擇不同的方法純化RNA，以達(dá)到佳的實(shí)驗(yàn)效果。RNA得率檢測(cè)——分光光度計(jì)法RNA得率有很強(qiáng)的組織特異性，不同組織RNA
2010
01-26

RNA的保護(hù)
RNA的保護(hù)與DNA提取實(shí)驗(yàn)相比，RNA的提取實(shí)驗(yàn)常常較為困難，這主要是由于RNA非常容易降解。而造成RNA降解的原因來(lái)自內(nèi)因和外因兩個(gè)方面。內(nèi)因：RNA核糖殘基的2’和3’位置帶有羥基，易被水解；外因：生物體內(nèi)和外部環(huán)境中存在大量RNase，并且RNase不易失活，高溫后仍然能夠正確折疊恢復(fù)活性。因此，從樣品的儲(chǔ)存、RNA的提取以及RNA提取完成后的保存，我們都需要格外小心，處處防范RNase對(duì)RNA的降解作用。下面，我們將介紹RNA提取過(guò)程中保護(hù)RNA的措施。1、提取前的RNA保護(hù)材料樣品中
2010
01-18

細(xì)胞從培養(yǎng)皿上的解離
細(xì)胞從培養(yǎng)皿上的解離以下通用步驟可以在保持細(xì)胞完整性的同時(shí)從培養(yǎng)器皿中分離多種細(xì)胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細(xì)胞系。應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定不同體系所需的佳條件和濃度。?在傳代培養(yǎng)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞存活率。?細(xì)胞存活率應(yīng)大于90%。?對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。1．去除器皿中原有細(xì)胞培養(yǎng)基。2．用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細(xì)胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)。搖動(dòng)培養(yǎng)瓶1-2分鐘以沖洗細(xì)胞層，然后倒掉清洗溶液。3．在培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)以2-3ml/25cm2的比例加入選定的解
2010
01-18

原代組織細(xì)胞的解離
原代組織細(xì)胞的解離從原代組織上獲取單個(gè)細(xì)胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細(xì)胞的時(shí)間，以獲得高的存活率。按下面的方法解聚整個(gè)組織，以獲得大量細(xì)胞。胰酶1．先去除無(wú)關(guān)組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過(guò)在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進(jìn)行重懸來(lái)清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復(fù)清洗2-3次。2．將裝有組織碎塊的容器置于冰上，去掉所有上清液。在不含鈣鎂的平衡鹽溶液中加入0.25%胰酶（每100mg組織大約需要1ml胰酶）。3．在4℃下孵育6-18小時(shí)，
2010
01-18

深低溫保藏細(xì)胞的解凍
深低溫保藏細(xì)胞的解凍深低溫保藏的細(xì)胞十分脆弱，要輕柔操作。快速解凍深低溫保藏的細(xì)胞，然后直接將其接種到*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，如果細(xì)胞對(duì)抗凍劑（DMSO或甘油）特別敏感，則離心除去抗凍劑，然后將細(xì)胞接種到*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。下面是深低溫保藏細(xì)胞的建議解凍步驟：直接接種法1．從凍存管中取出細(xì)胞，用37℃水浴快速解凍。2．將細(xì)胞直接接種到*生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。每毫升凍存細(xì)胞需要10-20ml*生長(zhǎng)培養(yǎng)基。計(jì)算活細(xì)胞的個(gè)數(shù)。細(xì)胞接種量至少要達(dá)到3X105活細(xì)胞/ml。3．將細(xì)胞培養(yǎng)12-24h。更換新鮮*生長(zhǎng)培養(yǎng)基以去
2010
01-18

使用抗生素和抗真菌素進(jìn)行去污培養(yǎng)
使用抗生素和抗真菌素進(jìn)行去污培養(yǎng)當(dāng)不可替代的培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生污染時(shí)，研究人員可以嘗試消除或控制污染。首先，確定污染類(lèi)型是細(xì)菌、真菌、支原體還是酵母。將污染的培養(yǎng)物與其他細(xì)胞系隔離。實(shí)驗(yàn)用消毒劑清洗培養(yǎng)箱和層流通風(fēng)櫥，檢查HEPA（粒子空氣）過(guò)濾器。高濃度的抗生素和抗真菌素可能對(duì)某些細(xì)胞系有毒害作用。因此，應(yīng)測(cè)定劑效關(guān)系以確定抗生素和抗真菌素的毒性劑量。這一點(diǎn)在使用AmphotericinBsolubilized等抗真菌素或泰樂(lè)菌素等抗生素時(shí)至關(guān)重要。下面給出了確定毒性劑量和去污培養(yǎng)的推薦步驟。1．解
2010
01-11

DNA產(chǎn)物純化試劑盒簡(jiǎn)介
DNA產(chǎn)物純化試劑盒簡(jiǎn)介：對(duì)于TA克隆、酶切或者直接測(cè)序等試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，純化PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物是非常必要的。以TA克隆為例，其成功率跟目的片段的純度高低具有重要關(guān)系。雖然未經(jīng)過(guò)純化的PCR產(chǎn)物也可以跟載體連接，但會(huì)增加篩選陽(yáng)性克隆的難度，因?yàn)镻CR產(chǎn)物中的dNTP和引物等可能也會(huì)跟載體連接。在進(jìn)行連接試驗(yàn)時(shí)，這些非特異性的產(chǎn)物會(huì)跟特異性產(chǎn)物相互競(jìng)爭(zhēng)，從而導(dǎo)致連接效率下降。DNA片段純化回收原理在獲得DNA片段后，一般采用吸附材料的方法去除雜質(zhì)和純化DNA片段。目前大多數(shù)生物公司都采用硅基質(zhì)吸附材料
2010
01-11

質(zhì)粒提取試劑盒簡(jiǎn)介
質(zhì)粒提取試劑盒簡(jiǎn)介：質(zhì)粒（Plasmid）是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，它具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，能在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。質(zhì)粒提取原理及流程：較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質(zhì)粒（15kb）。堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法，其原理為：染
2010
01-11

基因組DNA提取試劑盒簡(jiǎn)介
基因組DNA提取試劑盒簡(jiǎn)介：DNA是遺傳信息的載體，是重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對(duì)象，為了進(jìn)行測(cè)序、雜交、基因表達(dá)、文庫(kù)構(gòu)建等試驗(yàn)，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中重要、基本的操作之一。Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒，如植物、動(dòng)物、細(xì)菌、細(xì)胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提取的基因組純度高，片段大小在50kb左右。用戶可根據(jù)需要選用不同的試劑盒來(lái)進(jìn)行不同樣品的抽提。一、基因組D
2010
01-04

TNFα免疫組化染色試劑盒
系列SABC試劑盒使用說(shuō)明書(shū)TNFα免疫組化染色試劑盒產(chǎn)品編號(hào)：SA2041保存：4℃冷藏有效期：一年工作原理：TNFα是腫瘤壞死因子α抗原，該蛋白和誘導(dǎo)細(xì)胞的快速死亡有關(guān)?？贵w：兔抗TNFα抗原，親和純化抗體。適宜種屬：人、大鼠、小鼠組織。標(biāo)本處理：細(xì)胞涂片，冰凍和石蠟切片。染色模式：細(xì)胞漿。試劑盒內(nèi)容：1．5％BSA封閉液2ml或5ml，組織切片的封閉。2．兔抗TNFα抗原2ml或5ml。3．生物素化山羊抗兔IgG，2ml或5ml。4．SABC，2ml或5ml。鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶

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