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離子交換層析法純化細(xì)胞外囊泡2017/10/16

盡管進(jìn)行了有大量的研究，但是細(xì)胞外囊泡（EVs）的純化仍然很困難。塞爾維亞科學(xué)家BojanaMilutinovic等比較了離子交換層析法和常用的蔗糖密度梯度離心法對EVs的純化效果。差速離心之后通過離子交換層析或蔗糖密度梯度離心可以分離到正常人羊水中大量的EVs。通過電泳和凝集素印跡或者免役印跡檢測總蛋白、不同EVs標(biāo)志物以及已知污染物的分布來評估分離的EVs的純度。研究結(jié)果表明，其他不同電荷分子中帶負(fù)電荷的EVs得到有效分離，通過比較分析，離子交換層析在EVs分離上的效果優(yōu)于蔗糖密度梯度離心。

用于宏基因組學(xué)研究的不同環(huán)境樣本中快速DNA提取2017/09/19

宏基因組學(xué)測序的主要瓶頸是快速有效的DNA提取。我們對多種樣本類型采用了三種磁珠提取法平臺(KingFisher,epMotion,ａndTecan)和一種標(biāo)準(zhǔn)化離心柱法平臺進(jìn)行了DNA提取效率的比較實驗，這些樣本包括糞便、口腔、皮膚、土壤和水。美國科學(xué)家ClarisseMarotz等提取重復(fù)樣本并且用16SrRNA基因擴(kuò)增平行測序來評估提取差異和DNA質(zhì)量。數(shù)據(jù)證明，與樣本的多樣性相比，提取方法對測序結(jié)果的任何影響很小。然而，KingFisher平臺可以在zui短的時間內(nèi)產(chǎn)生zui大量的高質(zhì)量

采用丙烯酰胺和電泳共聚合方法進(jìn)行單鏈DNA的純化2017/08/16

單鏈寡核苷酸DNA（ssDNA）用于適配子、雜交探針和在DNA納米技術(shù)中的新型應(yīng)用。目前純化ssDNA的方法要求鏈分離步驟和單獨(dú)的大小分離步驟，但是仍然可能在樣本中殘留雙鏈DNA雜質(zhì)。美國科學(xué)家采用商品化的聚丙烯DNA引物來固定聚丙烯酰胺基質(zhì)PCR產(chǎn)物中的一條鏈。電泳使非交聯(lián)DNA進(jìn)入凝膠，期望大小的單鏈產(chǎn)物在凝膠中可以回收。結(jié)果展示了此種方法可以純化高產(chǎn)量的、高純度的ssDNA。原文：TulsiRamDamase,AndrewD.Ellington,ａndPeterB.Allen.Purifi

玻璃器皿（包括蓋玻片、載玻片）清洗技術(shù)2017/08/01

注意：所有清洗工作，都必須采取嚴(yán)格的安全預(yù)防措施！1.玻璃器皿的清洗法（1）首先配制清潔劑（也叫洗液）：200mg重鉻酸鉀，1000ml清水，1000ml濃硫酸（工業(yè)用）。將重鉻酸鉀先溶于水中，然后將濃硫酸逐滴加入重鉻酸鉀水溶液中去，不使硫酸濺出。配好后，盛在有玻璃塞的玻璃容器內(nèi)，防止空氣氧化。洗液可重復(fù)使用直至變?yōu)樗{(lán)黑色為止。（2）將待洗玻璃器皿放在肥皂水中沸浴0.5h.（3）然后用清水沖凈后放入烘箱烘干（或自然晾干）。（4）干后，浸入洗液約10min.（5）再用流水沖凈后烘干（或晾干）。（6

定期維護(hù)移液器2017/07/21

移液器的維護(hù)和移液器的操作都很重要，但很少有人會對移液器進(jìn)行定期的維護(hù)——沒辦法，移液器看起來太簡單了!只是移液器并不像看起來那樣簡單，并且越是的移液器，越需要定期的維護(hù)。一.外部清潔移液器的外部清潔比較簡單，主要還是一個“面子工程”——我想每個人都不希望自己手里握的的移液器臟兮兮的——所以，我建議使用者還是經(jīng)常清潔一下移液器的外表面。當(dāng)然，由于移液器的外殼都有一定的抗腐蝕性，所以常見的有機(jī)溶劑（如乙醇）和清潔劑（如洗潔精）都可以使用。但一定要注意兩點：其一，務(wù)*紙或布蘸取有機(jī)溶劑或清潔劑（后面

適用于不同反應(yīng)體積的重組酶聚合酶等溫擴(kuò)增技術(shù)2017/07/17

采用PCR或等溫擴(kuò)增的方法來擴(kuò)增DNA（或RNA）時，反應(yīng)溫度在50℃以上，反應(yīng)體積介于10-100ul之間，并且可能需要在樣品上覆蓋一層油性物質(zhì)或采取相似的封閉操作。這是因為，在反應(yīng)的過程中伴隨的蒸發(fā)現(xiàn)象致使反應(yīng)體積不可過小，另一方面，較大的反應(yīng)體積會消耗更多的耗材，并且在循環(huán)擴(kuò)增過程中無法有效的進(jìn)行溫度控制（達(dá)到預(yù)定的溫度需要較長的時間）。TwistDx’s提出的重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）技術(shù)對這一難題給出了解決方案。重組酶聚合酶擴(kuò)增反應(yīng)可在低溫（通常在37-42℃，可以在更低溫度下進(jìn)行）下

pH的測定2017/07/06

一、pH的定義溶液的酸堿性可用[H+]或[OH-]來表示，習(xí)慣上常用[H+]來表示。因此溶液的酸度就是指溶液中[H+]的大小。對于很稀的溶液，用[H+]來表示溶液的酸堿性往往既有小數(shù)又有負(fù)指數(shù)，使用不方便，因此常用pH值來表示溶液的酸堿性。pH值是指氫離子濃度的負(fù)對數(shù)，即pH=一lg[H+]例如：[H+]=10一7mol/L，pH=7；[H+]=10一9mol/L，pH=9；[H+]=10一3mol/L，Ph=3。pH值的使用范圍一般在0～14之間。pH值越小，溶液的酸性越強(qiáng)，堿性越弱；pH值越

采用 CRISPR/Cas9介導(dǎo)敲入技術(shù)構(gòu)建2017/06/13

采用CRISPR/Cas9介導(dǎo)敲入技術(shù)構(gòu)建可量化生產(chǎn)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定細(xì)胞系從植物標(biāo)本中提取的DNA是高度片段化的，因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴(yán)格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進(jìn)，已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此，德國科學(xué)家RafalM.Gutaker等將這些改進(jìn)方法應(yīng)用到植物標(biāo)本的DNA提取，并通過測序評估提取性能，該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進(jìn)行準(zhǔn)確評估。與使用十六烷基*基溴化銨（CTAB）提取相比，使用N-笨甲酰溴（PTB）緩沖液提取的中間片段長

導(dǎo)致PCR假陽性的污染源2017/05/22

PCR反應(yīng)的特點是具有較大擴(kuò)增能力與*的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。一、標(biāo)本交叉污染源：收集標(biāo)本的容器：標(biāo)本放置時，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染；吸樣槍：標(biāo)本核酸模板在提取過程中，由于污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染；氣溶膠：zui可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式。在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管，開蓋時、吸樣時及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的

植物標(biāo)本超短DNA分子的提取2017/05/05

從植物標(biāo)本中提取的DNA是高度片段化的，因此提取短DNA分子的提取步驟非常嚴(yán)格。動物尸體DNA的提取方法和DNA文庫制備方法的改進(jìn)，已經(jīng)能夠有效提取小于50bp的DNA分子片段。因此，德國科學(xué)家RafalM.Gutaker等將這些改進(jìn)方法應(yīng)用到植物標(biāo)本的DNA提取，并通過測序評估提取性能，該方法能夠?qū)NA片段長度的分布進(jìn)行準(zhǔn)確評估。與使用十六烷基*基溴化銨（CTAB）提取相比，使用N-笨甲酰溴（PTB）緩沖液提取的中間片段長度減少35%，改進(jìn)DNA與硅膜的結(jié)合條件可以額外減少10%。他們并未觀

血清在細(xì)胞培育中的鑒別方法及效果2017/04/18

鑒別方法：血液凝結(jié)析出的淡黃色通明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反響被激活，血液敏捷凝結(jié)，構(gòu)成膠凍。其周圍所析出之淡黃色通明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心獲得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)成為纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的差異。而在凝血反響中，血小板開釋出很多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了改變。這些成分都留在血清中并持續(xù)發(fā)生改變，如凝血酶原成為凝血酶，并隨血清寄存時刻逐步削減以致不見。這些也都是與血漿差異的地方。但很多未參與凝血反響的物質(zhì)則與

基因的PCR擴(kuò)增和DNA熔解分析2017/04/06

TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴(kuò)增和DNA熔解分析含TaqMan探針的非對稱PCR以及DNA熔解分析被應(yīng)用于突變檢測，可有效用于臨床診斷。該方法簡單、成本低，在一個封閉的離心管中進(jìn)行，可zui大限度的減少反應(yīng)時間，減輕工作量，以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規(guī)測序更加靈敏（兩者的突變檢測閾值分別為～5%和15%～20%），但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術(shù)，如焦磷酸測序和微滴型數(shù)字PCR而言，其靈敏度相差甚遠(yuǎn)。IrinaV.Botezatu等科學(xué)家證明，在

培養(yǎng)基的分類2017/03/13

一、化學(xué)分類：1.天然培養(yǎng)基,指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。2.組合培養(yǎng)基,又稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基，是一類按微生物的營養(yǎng)要求設(shè)計后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。3.半組合培養(yǎng)基,指一類主要以化學(xué)試劑配制，同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如，馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。二、物理分類：1.固體培養(yǎng)基,一類外觀呈固態(tài)的培養(yǎng)基。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。2.液體培養(yǎng)基,一類呈液態(tài)的培養(yǎng)基。3

分層細(xì)胞膜微區(qū)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)從而影響受體二聚體的穩(wěn)定性2017/02/23

信號分子復(fù)合物動力學(xué)的結(jié)果顯示，信號分子復(fù)合物是調(diào)控細(xì)胞免疫特異性的關(guān)鍵。ChangjiangYou等科學(xué)家提出了一種實驗結(jié)合計算的研究方法，通過對細(xì)胞膜微區(qū)測量結(jié)果的量化構(gòu)建了I型干擾素受體復(fù)合物動力學(xué)。通過長期的雙色量子點（QD）示蹤，他們發(fā)現(xiàn)單個由配體誘導(dǎo)產(chǎn)生的受體異源二聚體的壽命取決于細(xì)胞膜骨架（MSK）的完整性，這一點被證明對有效的下游信號也是至關(guān)重要的。通過成對關(guān)聯(lián)示蹤，定位顯微鏡以及快速量子點示蹤，識別了一個在300nm范圍內(nèi)的第二限制。基于實驗數(shù)據(jù)，將一個定量空間隨機(jī)擴(kuò)散反應(yīng)模型

儀器標(biāo)識小妙招2017/02/06

儀器設(shè)備可分為三類：類：用于檢測出具數(shù)據(jù)的檢測儀器（也稱計量儀器）；主要有：電子天平、電子千分尺、玻璃棒溫度計、耐震壓力表、表面電阻測試儀；第二類：那些影響檢測工作質(zhì)量、又不需檢定或校準(zhǔn)的輔助設(shè)備裝置，稱為“002”類；主要有：恒溫恒濕箱、酒精噴燈燃燒試驗箱、氣動式注漿泵；第三類：控制質(zhì)量活動環(huán)境用的一般設(shè)備，稱為“003”類；主要有：空調(diào)、冰箱。凡列入固定資產(chǎn)的儀器設(shè)備，均需要進(jìn)行分類、編號、登記、入賬（包括總賬、分賬、明細(xì)帳）、建卡。實驗室儀器設(shè)備標(biāo)識的使用管理儀器設(shè)備的標(biāo)識管理可以采用的方

核苷酸類似物N4-甲基-2′-脫氧胞苷....2016/12/30

核苷酸類似物N4-甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸用于高GC含量DNA的PCR擴(kuò)增采用標(biāo)準(zhǔn)的脫氧核苷三磷酸體系或體系中的dCTP部分或者全部被其N4甲基化類似物——N4甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸（N4me-dCTP）所代替的混合體系，用TaqDNA聚合酶進(jìn)行高GC含量DNA的PCR擴(kuò)增。用以上兩種反應(yīng)體系來擴(kuò)增一段高GC含量（GC含量為78.9%）的DNA片段，含有N4me-dCTP的PCR體系擴(kuò)增出了高產(chǎn)量的目的片段，而包含標(biāo)準(zhǔn)核苷酸的反應(yīng)體系則產(chǎn)生了大量的非特異性擴(kuò)增。在對另一段高GC

化驗室分析天平的維護(hù)與保養(yǎng)2016/12/12

化驗室分析天平的維護(hù)與保養(yǎng)是*的：隨著人們對產(chǎn)品質(zhì)量意識的日益加強(qiáng),化學(xué)分析儀器的自動化程度不斷提高，化驗室中分析天平的使用也越來越廣泛了。電子分析天平雖操作簡單，但日常維護(hù)也是*的。日常要注意以下幾點：1、將天平置于穩(wěn)定的工作臺上，避免振動、氣流及陽光照射，防止腐蝕性氣體的侵蝕。高精度的電子天平要滿足說明書要求的溫度和濕度波動的條件，才能達(dá)到規(guī)定的稱量準(zhǔn)確度要求。2、稱量易揮發(fā)和具有腐蝕性的物品時，要盛放在密閉的容器中，以免腐蝕和損壞電子天平。3、秤盤和外殼可以用軟布輕輕擦凈，切不可用強(qiáng)溶劑擦

高靈敏度快速檢測紅細(xì)胞中亞鐵血紅素含量的方法2016/11/03

高靈敏度快速檢測紅細(xì)胞中亞鐵血紅素含量的方法在實驗室條件下快速準(zhǔn)確的檢測出亞鐵血紅素的含量是十分重要的，其重要程度正如胞內(nèi)血紅蛋白在新陳代謝中所扮演的重要角色。JasonR.Marcero等研究者將傳統(tǒng)的檢測方法（吡啶血色原檢測法，熒光亞鐵血紅素檢測法）與采用CLARiTY分光光度計實施的以光譜技術(shù)為基礎(chǔ)的檢測方法相比較。用以上三種檢測方法檢測血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，老鼠全血，小鼠紅白血病細(xì)胞（MEL）以及小鼠K562細(xì)胞，檢測結(jié)果顯示所有樣本均富含與血紅蛋白相結(jié)合的亞鐵血紅素。然而在亞鐵血紅素的檢測過

移液器保養(yǎng)的細(xì)則2016/10/19

移液器保養(yǎng)的細(xì)則移液器作為實驗室中zui常見也是zui*的實驗室設(shè)備，實驗人員對其日常的使用操作時一定十分謹(jǐn)慎小心。但是許多人都會忽略掉移液器在使用完畢后的相關(guān)維護(hù)跟保養(yǎng)的事宜。移液器維護(hù)保養(yǎng)時的注意事項：1.定期清洗移液槍，可以用肥皂水或60％的異丙醇，再用蒸餾水清洗，自然晾干。2.高溫消毒之前，要確保移液器能適應(yīng)高溫。3.如不使用，要把移液槍的量程調(diào)至zui大值的刻度，使彈簧處于松弛狀態(tài)以保護(hù)彈簧。4.校準(zhǔn)是可以在20-25度環(huán)境中，通過重復(fù)幾次秤量蒸餾水的方法來進(jìn)行。5.使用時要檢查是否有

定量環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增熒光嵌入染料的比較2016/09/26

實時或者定量環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增是一項有前景的技術(shù)，用于生物和環(huán)境中病原體的準(zhǔn)確檢測。俄羅斯科學(xué)家IgorP.Oscorbin等對六種熒光嵌入染料-SYTO-9，SYTO-13，SYTO-82，SYBRGreenI，SYBRGold，EvaGreen在三種不同的定量環(huán)介導(dǎo)的等溫擴(kuò)增模型系統(tǒng)中的表現(xiàn)進(jìn)行了一項比較研究。SYTO-9和SYTO-82的結(jié)果，可以用于額外增加的酶和模板滴定研究。SYTO-82顯示了*的時間閾值（Tt）和信號噪聲比（SNR）組合。原文：IgorP.Oscorbin,Ekater