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發(fā)酵培養(yǎng)基pH值影響有哪些2022/03/23

發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值，對微生物生長具有非常明顯的影響，也是影響發(fā)酵過程中各種酶活的重要因素。pH值對微生物的生長繁殖和產(chǎn)物合成的影響有以下幾個方面：①影響酶的活性，當pH值抑制菌體中某些酶的活性時，會阻礙菌體的新陳代謝；②影響微生物細胞膜所帶電荷的狀態(tài)，改變細胞膜的通透性，影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝產(chǎn)物的排泄；③影響培養(yǎng)基中某些組分的解離，進而微生物對這些成分的吸收；④pH值不同，往往引起菌體代謝過程的不同，使代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，是引起pH值變化的主要原因，

抗原抗體反應四個主要特點2022/03/15

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行。在機體內(nèi)，當免疫細胞被抗原激活后，由B細胞分化成熟為漿細胞后所合成、分泌的一類能與相應抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白（immunoglobulin，Ig），激活補體系統(tǒng)從而解除抗原對機體的損傷?？乖贵w反應的主要特點有：1、特異性：特定的抗體只能與特定的抗原（肽段/蛋白）結合，這在WB一抗二抗的種屬及反應性的選擇常用到；2、可逆性：抗原抗體的結合是非共價結合，在一定條件下這種非共價結合是

介紹抗原和抗體三個主要不同點2022/03/01

1、定義不同抗原是能夠引起人bai體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生du免疫應答，并能與抗體和淋巴細zhi胞在體內(nèi)外結合的物dao質(zhì)。抗原可分為*抗原和半抗原，*抗原具有免疫原性和反應原性兩種能力，*抗原you病原體、異種動物血清等等。半抗原只具有反應原性而沒有免疫原性，有磺胺、青霉素等。抗體是一種由漿細胞分泌的大型γ型蛋白質(zhì)，能夠被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如病毒、細菌以及機體本身存在的死亡細胞等等?？贵w能夠識別特定外來物的一個*特征，目前僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的體液之中以及B細胞的細胞膜表面。2、功能不同抗

哪些外源性物質(zhì)影響ELISA檢測結果2022/02/22

外源性物質(zhì)經(jīng)常是由于用于ELISA測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。（1）標本溶血由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中，會導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾作用，標本采集時必須注重避免溶血。（2）標本受細菌污染因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的標本同溶血標本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾

混和培養(yǎng)物分離純化主要六種方法2022/02/15

含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（mixedculture）。如果在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培養(yǎng)（pureculture）。在進行菌種鑒定時，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化，主要方法有以下六種。１、傾注平板法首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40-50°左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，

質(zhì)粒提取鑒定及保存2022/01/27

1、質(zhì)粒的提取(Tiangen質(zhì)粒提取試劑盒)：a)挑菌：選取培養(yǎng)板中大小中等的單個菌落，消毒牙簽接種到10ml搖菌管中，其中含有卡那-霉素的LB約5ml，37°C，220rpm恒溫搖床中震蕩培養(yǎng)過夜。b)取上述2.0ml培養(yǎng)液，于常溫下12000rpm離心1分鐘，棄上清，干燥沉淀。c)加入250ul溶液P1(配有去RNA酶，4°C保存)，渦旋振蕩，*懸浮細菌，不能留有沉淀，否則會影響裂解。d)加入250ul溶液P2，快速上下顛倒8次，常溫靜置3分鐘，可見混合液逐漸變清、粘稠，表示已充分裂解。e

鑒定血清方法有哪些？2022/01/18

一、鑒定的方法1、理化性質(zhì)：蛋白含量包括血清總蛋白含量、球蛋白含量、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項非常重要的指標，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。2、微生物檢測：對支原體、病毒的檢測，支原體是一種很小的微生物，可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學顯微鏡下難于察覺，細胞也能生長繁殖，但會影響實驗結果。3、促生長效果：這是血清重要的特性，應當以培養(yǎng)的細胞來檢測。4、對于使用者：判斷血清質(zhì)量先從外觀入手。好的血清應該是透明清亮，土黃色或棕黃色，

歸納造成ELISA試劑盒標準品溢值的原因2022/01/11

ELISA試劑盒實驗步驟繁瑣，操作者們所犯的問題也各有不同。現(xiàn)我司技術就造成ELISA試劑盒標準品溢值的原因解析：1、樣品/標準品不正確稀釋。2、孵育時間/溫度不正確。3、在孵育時為蓋上酶聯(lián)板覆蓋物：在孵育時需蓋上酶聯(lián)板覆蓋物，以防止液體蒸發(fā)或孵育期間的污染。每個試劑盒內(nèi)均有足夠數(shù)量的酶聯(lián)板覆蓋物。4、檢測波長不正確：要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。5、TMB底物的顯色時間過長：請監(jiān)控顯色時間。說明書中所示的顯色時間可能因為溫度和其它檢測條件的不同而稍有變化。6、樣品不適合此檢測：在說明書中

解答ELISA實驗出現(xiàn)白板異常的原因2022/01/05

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可

?聚合酶鏈反應(PCR)實驗常見問題及解決方法2021/12/27

PCR實驗原理：聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片段。PCR反應由一系列的變性→退火→延伸反復循環(huán)構成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進行延伸。理論上，經(jīng)過N次循環(huán)可使特定片段擴增到2n

抗原抗體反應關鍵三因素2021/12/21

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行。特點有特異性、比例性、可逆性抗原抗體反應的過程是經(jīng)過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化?？乖贵w反應的特點主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。特異性是抗原抗體反應的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結構的互補性確定的。影響抗原抗體反應的三因素：1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點分別為

?PCR的循環(huán)的參數(shù)2021/12/16

1.預變性（Initialdenaturation）模板DNA*變性與PCR酶的*激活對PCR能否成功至關重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。2.循環(huán)中的變性步驟循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列*變性，可能的情況下可縮短該步驟時間，變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不*，易造成擴增失敗。3.引物退火（Primerannealing）退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值為參考，根據(jù)擴增的長度適當下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實驗基礎上

ELISA雙抗體夾心法檢測未知抗原2021/11/29

用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。4

細胞收到后處理方法2021/11/24

您需要準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會導致對細胞處理不當,或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。1、收到細胞,第1時間要觀察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細胞密度有疑議及時咨提供細胞的技術人員。由于運輸?shù)臅r間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時有點不一樣,主要是貼壁牢固問冋題。比如29紅,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培

ELISA試劑盒加樣的具體步驟2021/11/17

ELISA試劑盒加樣的具體步驟，即加標本，加酶物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)有些濃縮，散布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上激烈振動。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清天然凝結、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液，再在其參加血清標本，然后在微型震動器上震動1分鐘以確?；旌?。通常說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃，超越一星期測定的需低溫冰存?？捎米鱁LISA測定的標本非常廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、大便)等均可作標

了解十五種細胞染色試劑2021/11/08

1、酸性品紅：酸性品紅是酸性染料，呈紅色粉末狀，能容於水，略溶於酒精（0.3%）。是良好的細胞制染色劑，在動物制片上應用很廣，在植物制片上用來染皮層、髓部等薄壁細胞和纖維素壁。它跟甲基綠同染，能顯示線粒體。組織切片在染色前先浸在帶酸性的水中，可增強它的染色力。酸性品紅容易跟堿起作用，所以染色過度，易在自來水中褪色。2、剛果紅：剛果紅是酸性染料，呈棗紅色粉末狀，能溶於水喝酒精，遇酸呈藍色。它能作染料，也用作指示劑。它在植物制片中常作為蘇木精或其他細胞染料的襯墊劑。用來染細胞質(zhì)時，能把膠制或纖維素染

了解ELISA檢測代測服務2021/11/03

一、ELISA檢測概述ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的

抗體的特異性的選擇需考慮的因素2021/10/26

抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力。抗體的特異性高,它的識別能力就強。特異性的選擇主要需要考慮因素：蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、標記物的特異性。1、蛋白特異性針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個細節(jié)要區(qū)分：a.重組蛋白如果不是全長表達，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。b.內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進行序列比對，并結合抗體免疫原序列，查看交叉反應的情況。c.磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制

溶解與稀釋ELISA標準品方法步驟2021/10/20

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱，是一種檢測方法，而標準品是相對于具體的物質(zhì)有具體的標準品，所以不存在說ELISA的標準品。ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。正確溶解、稀釋標準品如下：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據(jù)瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋

組織培養(yǎng)消除污染的實驗步驟2021/10/11

當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟:（1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。（2）分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)