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						上海美軒生物科技有限公司
            中級(jí)會(huì)員 | 第12年
            
					
            
				
            
			
            
		
            
	
            
	
	
            
		
            
			
		
            
	
            

            

	
            
		
            
			
			
            
							
            
					
            細(xì)胞究竟怎么養(yǎng)？2024/05/13
            
					
            
				細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的廣泛應(yīng)用讓我們對(duì)生命的奧秘有了更深一步的理解，同時(shí)也為醫(yī)學(xué)研究和臨床治療提供了重要支持。無(wú)論是研究者還是醫(yī)生，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的掌握都是至關(guān)重要的，它們將開(kāi)啟更多關(guān)于生命的精彩探索之旅。讓我們一起走進(jìn)細(xì)胞的微觀世界，探尋其中的無(wú)限可能吧！01細(xì)胞復(fù)蘇和傳代1.1細(xì)胞復(fù)蘇將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動(dòng)促進(jìn)其融化。移入15ml離心管中，加入8ml預(yù)熱的1640wan全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，1000rpmX5min，棄上清液。加入8ml1640培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加
					
            
				
            
								
            
					
            傳代細(xì)胞培養(yǎng)2017/05/31
            
					
            
				傳代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)原理：傳代細(xì)胞的培養(yǎng)使用已成功構(gòu)建的細(xì)胞株，大量培養(yǎng)狀態(tài)良好的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作之一，也是所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。傳代細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)流程：1.觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時(shí)擰緊蓋子。2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好)瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。3.打開(kāi)超凈臺(tái)(先開(kāi)風(fēng)機(jī)，后開(kāi)照明)，用75%乙醇清潔臺(tái)面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如
					
            
				
            
								
            
					
            熒光原位雜交原理及步驟2017/05/23
            
					
            
				熒光原位雜交/FISH技術(shù)服務(wù)熒光原位雜交FISH的原理：熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以將探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)、雜交特性高和可以多重染色等特點(diǎn)，因此在分子
					
            
				
            
								
            
					
            蛋白質(zhì)印跡的實(shí)驗(yàn)原理、方法與步驟2017/05/16
            
					
            
				蛋白質(zhì)印跡的實(shí)驗(yàn)原理、方法與步驟實(shí)驗(yàn)原理WesternBlot（蛋白質(zhì)印跡或免疫印跡）技術(shù)，以蛋白質(zhì)為檢測(cè)對(duì)象，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。實(shí)驗(yàn)采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質(zhì)分離，再轉(zhuǎn)移到固相載體（PVDF尼龍膜或NC膜）上；固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變；然后以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與其對(duì)應(yīng)的抗體（一抗）發(fā)生免疫反應(yīng)，特異性一抗再與和酶耦聯(lián)的第二抗體反應(yīng)，zui后在酶的作用下，導(dǎo)致底物顯色或化學(xué)發(fā)光顯影，來(lái)檢測(cè)
					
            
				
            
								
            
					
            流式細(xì)胞技術(shù)實(shí)驗(yàn)方法2017/05/02
            
					
            
				流式細(xì)胞技術(shù)實(shí)驗(yàn)方法PI染色操作步驟1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心，1500rpm,5min，棄上清液。2、加入PBS1ml離心洗滌1次，棄上清。3、加入2ml預(yù)冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定過(guò)夜。4、離心，棄上清液。5、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。6、加入RNaseA(工作濃度20ug/ml)于500ul1×PBS中，37℃孵育30min，離心。7、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。8、加入PI(工作濃度50ug/ml)于500ul1×PBS中，室溫避
					
            
				
            
								
            
					
            ELISA 原理與類(lèi)型2017/04/24
            
					
            
				1.ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物
					
            
				
            
								
            
					
            免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)步驟2017/04/17
            
					
            
				免疫組化步驟（ABC法）1。4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過(guò)夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后；2。加入配好的0.3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS100ml＋30%過(guò)氧化氫）30min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；3。加入配好的0.3%TritonX100（30%TritonX100＋0.01MKPBS100ml）30min，以增加細(xì)胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
					
            
				
            
								
            
					
            流式細(xì)胞術(shù)中熒光補(bǔ)償該如何調(diào)節(jié)？2017/04/10
            
					
            
				在討論流式細(xì)胞術(shù)中熒光補(bǔ)償該如何調(diào)節(jié)的問(wèn)題前，我們先了解下流式實(shí)驗(yàn)為何需要調(diào)補(bǔ)償？熒光分子在被激發(fā)后都會(huì)發(fā)射特定波長(zhǎng)范圍的光，但是這些熒光的發(fā)射光之間會(huì)發(fā)生光譜重疊。熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)是糾正熒光素發(fā)射光譜重疊的過(guò)程，即從一個(gè)被檢測(cè)的熒光信號(hào)中減掉溢漏過(guò)來(lái)的其他光。熒光發(fā)射光光譜重疊示例：以FITC和PE為例來(lái)看光譜重疊。FITC單染管的熒光會(huì)部分漏到PE通道中，而這部分需要從PE通道中減掉溢漏過(guò)來(lái)的FITC熒光。那么熒光補(bǔ)償該如何調(diào)節(jié)呢？?調(diào)節(jié)電壓?檢測(cè)熒光通道的自發(fā)熒光?每個(gè)熒光通道做單染管對(duì)照檢
					
            
				
            
								
            
					
            PCR技術(shù)操作步驟2017/04/05
            
					
            
				PCR實(shí)驗(yàn)步驟典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是：將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)
					
            
				
            
								
            
					
            諾華CAR- T療法今日獲美國(guó)FDA優(yōu)先審評(píng)資格2017/04/01
            
					
            
				3月29日，諾華宣布美國(guó)FDA已為其CAR-T療法CTL019（tisagenlecleucel-T）的生物制劑許可申請(qǐng)頒發(fā)了優(yōu)先審評(píng)資格。這意味著諾華CAR-T生物制劑許可申請(qǐng)的審批流程有望得到進(jìn)一步的縮減。CTL019zui初由賓夕法尼亞大學(xué)開(kāi)發(fā)。2012年，諾華與賓夕法尼亞大學(xué)達(dá)成合作協(xié)議，共同研究、開(kāi)發(fā)與商業(yè)化包括CTL019在內(nèi)的多項(xiàng)CAR-T療法，用以癌癥治療。目前，CTL019申請(qǐng)上市的適應(yīng)癥為兒童或年輕人中復(fù)發(fā)或難治性的急性B細(xì)胞型淋巴性白血?。˙-cellacutelympho
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別2016/06/28
            
					
            
				人教版（2002年審定通過(guò)的全一冊(cè)）高中生物教材中細(xì)胞株和細(xì)胞系的概念內(nèi)涵與浙科版的概念內(nèi)涵不同甚至*相反。人教版2004年審定通過(guò)的《現(xiàn)代生物技術(shù)專(zhuān)題》高中教材就沒(méi)有出現(xiàn)這二個(gè)概念。據(jù)資料記載是因?yàn)檫@二個(gè)概念一度混用，導(dǎo)致概念不清。人教版高中生物細(xì)胞株概念強(qiáng)調(diào)結(jié)束原代培養(yǎng)并可以進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群，并不強(qiáng)調(diào)細(xì)胞群的純度；浙科版的細(xì)胞株概念強(qiáng)調(diào)細(xì)胞群的純度，認(rèn)為細(xì)胞株是克隆的結(jié)果。人教版高中生物細(xì)胞系概念強(qiáng)調(diào)這些細(xì)胞已發(fā)生部分遺傳物質(zhì)的改變，帶有癌變的可以傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群；浙科版的細(xì)胞系概念強(qiáng)調(diào)
					
            
				
            
								
            
					
            免疫熒光技術(shù)操作步驟2015/11/24
            
					
            
				一.直接免疫熒光法測(cè)抗原基本原理將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對(duì)使用標(biāo)記抗體用量偏大。試劑與儀器磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4熒光標(biāo)記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進(jìn)行稀釋緩沖甘油：分析純無(wú)熒光的甘油9份+pH9.20.2M碳酸鹽緩沖液1份配制搪瓷桶三只（內(nèi)有0.01mol/L，pH7.4的PBS1500ml）有蓋搪瓷盒一只（內(nèi)鋪一層浸濕的紗布?jí)|）熒光顯微鏡玻片架濾紙37℃溫箱等。
					
            
				
            
								
            
					
            細(xì)胞傳代的一般方法2015/10/16
            
					
            
				開(kāi)始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬(wàn)單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1）、細(xì)胞吹打管（20ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)C02孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長(zhǎng)狀態(tài)良好
					
            
				
            
								
            
					
            影響細(xì)胞生長(zhǎng)的幾點(diǎn)因素2015/09/15
            
					
            
				一、溫度：一般哺乳類(lèi)及禽類(lèi)細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng).細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時(shí),雖影響細(xì)胞代謝,但并無(wú)傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時(shí),細(xì)胞仍能生存和生長(zhǎng),但速度減緩,不過(guò),魚(yú)類(lèi)細(xì)胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃.若溫度過(guò)低,在降到冰點(diǎn)以下時(shí),細(xì)胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡,但若向培養(yǎng)基中加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）等保護(hù)劑,封入安瓿中后,置于液氮或低溫冰箱（-70℃）中,可起保護(hù)作
					
            
				
            
								
            
					
            警惕化學(xué)藥物篩選中的假陽(yáng)性藥物2015/05/14
            
					
            
				新藥開(kāi)發(fā)領(lǐng)域炙手可熱，大量研究人員蜂擁涌入。但是，當(dāng)中很多人缺乏應(yīng)有的引導(dǎo)，科研也做成了一團(tuán)漿糊。每當(dāng)生物學(xué)家們發(fā)現(xiàn)一個(gè)與疾病相關(guān)的靶點(diǎn)蛋白，他們就會(huì)想方設(shè)法尋找能夠與這個(gè)蛋白質(zhì)分子結(jié)合并影響其活性的化合物，這些有苗頭的化合物常被稱(chēng)為“活性化合物”。一次典型的藥物篩選流程能夠找到數(shù)千種活性化合物，它們可以作為疾病機(jī)理研究的工具，也是尋找新藥的基礎(chǔ)。但是，在篩選試驗(yàn)中，很多化合物展現(xiàn)出來(lái)的“活性”僅僅是一種假陽(yáng)性結(jié)果——它們的“活性”并不是基于化合物分子與蛋白質(zhì)之間特異性的作用。真正的藥物能夠作用
					
            
				
            
								
            
					
            免疫細(xì)胞去向的一種全新機(jī)制2014/06/24
            
					
            
				中科院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所陳劍峰研究組在的一項(xiàng)研究中，揭示了決定免疫細(xì)胞去向的一種全新機(jī)制。6月19日，相關(guān)研究成果在線發(fā)表于《發(fā)育細(xì)胞》。免疫系統(tǒng)是人體內(nèi)的一套奇妙的保護(hù)系統(tǒng)。它不但負(fù)責(zé)抵御外界細(xì)菌、微生物、病毒等的入侵，還負(fù)責(zé)清除體內(nèi)衰老、損傷、死亡以及發(fā)生癌變的自身細(xì)胞。確保免疫細(xì)胞在特定的時(shí)空遷移到人體內(nèi)的特定組織和器官是保證免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常功能的關(guān)鍵步驟。否則，人體會(huì)出現(xiàn)自身免疫疾病甚至癌癥等嚴(yán)重疾病。但困擾科學(xué)家的是，免疫細(xì)胞是如何決定其在人體內(nèi)的去向的。在陳劍峰研究員的指
					
            
				
            
								
            
					
            國(guó)內(nèi)*宮頸癌疫苗進(jìn)入三期臨床試驗(yàn)2014/05/28
            
					
            
				國(guó)內(nèi)*個(gè)、第三個(gè)宮頸癌疫苗產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目將在廈門(mén)海滄問(wèn)世，宮頸癌疫苗現(xiàn)已進(jìn)入三期臨床試驗(yàn)觀察階段。廈門(mén)萬(wàn)泰滄海生物技術(shù)有限公司II期基地在位于海滄的廈門(mén)生物醫(yī)藥港奠基，宮頸癌疫苗產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目在此問(wèn)世，并將于2018年前投產(chǎn)。該基地占地67834.644平方米，是對(duì)I期研發(fā)、生產(chǎn)基地的擴(kuò)展延伸。據(jù)介紹，II期基地將立足戊肝疫苗、宮頸癌疫苗、醫(yī)療器械、抗體藥物等創(chuàng)新產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)，產(chǎn)品起點(diǎn)高，技術(shù)設(shè)備*，國(guó)內(nèi)同行業(yè)水平。據(jù)悉，廈門(mén)萬(wàn)泰滄海生物技術(shù)有限公司是福建省*一家疫苗生產(chǎn)企業(yè)，2005年成立，200
					
            
				
            
							
				
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